Desenvolvimento de uma plataforma baseada na levedura Pichia pastoris para entrega de vacina de DNA profilática para o Zika vírus

Abstract

O Zika vírus (ZIKV) é um arbovírus que surgiu inesperadamente entre 2014 e 2015 no Brasil, causando uma epidemia e surtos de microcefalia. A infecção pelo ZIKV está associada a duas síndromes graves: congênita e Guillain-Barré. O controle do mosquito vetor e o desenvolvimento de vacinas profiláticas, são os principais métodos para combater a infecção. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de uma plataforma vacinal utilizando a levedura Pichia pastoris como carreadora de vacinas de DNA contra o Zika vírus (ZIKV). A escolha de P. pastoris se baseou em vantagens como fácil manipulação genética, status GRAS (Geralmente Reconhecido Como Seguro) e propriedades adjuvantes intrínsecas, que potencializam a resposta imunológica. Essa abordagem busca contribuir para o controle da infecção por ZIKV, oferecendo uma alternativa inovadora de plataforma vacinal que combina segurança e eficácia, visando à redução dos impactos do vírus na saúde pública. Foi desenvolvido o vetor de transferência pLT-CMV(ARS), utilizando o cassete de expressão do vetor comercial pVAX1 (Invitrogen), no qual está contido o promotor CMV, responsável pela expressão do gene-alvo em células de mamíferos e uma cauda de poliadenilação derivada do hormônio de crescimento bovino (bgH). Além disso, foi incorporado uma região do vetor pPICZαA (Invitrogen) que inclui um marcador de seleção para zeocina e uma origem de replicação que permite sua replicação em sistemas procariotos e uma sequência de replicação autônoma (ARS) para leveduras. Nesse vetor, foi inserido um antígeno sintético contendo epítopos das proteínas Envelope e NS1 do ZIKV. O vetor recombinante foi então utilizado para inserção em P. pastoris e as análises para confirmação da transformação foram feitas por PCR. Em seguida, foi avaliado o perfil de citocinas liberadas por células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) após estímulo com as leveduras recombinantes. Os resultados obtidos demonstraram a secreção de citocinas imunomoduladoras pelas PBMCs, com destaque para a produção significativa de TNF-α. No entanto, estudos adicionais, incluindo imunofenotipagem para a caracterização da resposta imune celular, ensaios pré-clínicos e testes de neutralização serão necessários para uma avaliação mais abrangente do potencial profilático da vacina.