Potencial in vitro de novas formulações de derivados tiofênicos frente células planctônicas e biofilme de isolados clínicos de Candida

Abstract

As infecções causadas por fungos têm sido cada vez mais frequentes, sobretudo as causadas por leveduras do gênero Candida . Historicamente, C. albicans é a espécie responsável pelo maior número de casos. Contudo, nas últimas décadas, mudanças têm ocorrido com notável surgimento de novas espécies, raras ou emergentes. Ademais, é notório e preocupante o alto índice de resistência antifúngica. Nesse contexto, o trabalho objetivou avaliar substâncias derivadas de compostos tiofenos quanto ao potencial antifúngico frente espécies clínicas de Candida. Foram incorporadas 12 cepas clínicas de Candida obtidas do grupo de pesquisa “Fungos de Interesse Médico e Leveduras de Interesse Biotecnológico”. Inicialmente, as amostras foram revisadas quanto à viabilidade utilizando-se caldo glicosado e o meio Sabouraud Dextrose Ágar-SDA com avaliação do crescimento em colônia central por até 72 horas de cultivo. Ainda, as culturas passaram por análise quanto à pureza a partir de observação macroscópica das colônias e do microcultivo analisado em lâminas ao microscópio óptico. Para as culturas que não estiveram puras, foram preparadas suspensões em água destilada esterilizada acrescida de 50mg/L de cloranfenicol. Destas, 0,5 mL foram semeados por “esgotamento” na superfície de SDA contido em placas de Petri mantidas a temperatura ambiente 21ºC±6ºC/72 horas. Após o surgimento das colônias, estas foram semeadas em tubos para realização dos testes de susceptibilidade antifúngica seguindo o M27 A4 Suplemento M60 do Clinical Laboratory Standard Institute-CLSI. Assim, a partir de culturas com 24 horas de crescimento foram preparadas suspensões em salina a fim de serem avaliadas quanto a sensibilidade/resistência ao fluconazol (droga controle) e 8 moléculas de tiofenos (nova opção terapêutica). As diluições foram feitas no meio Roswell Park Memorial Institute- RPMI suplementado com L-glutamina, não contendo bicarbonato de sódio e pH de 7,0 ± 0,1, ajustado com ácido Morfolino Propano Sulfônico (MOPS) em uma concentração de 0,165 mol/L. A interpretação do teste foi baseada na Concentração Mínima Inibitória (CIM) que caracterizou a cepa fúngica como sensível, dose dependente ou resistente a fluconazol. Quanto aos tiofenos, foi interpretado como a menor concentração capaz de inibir ou matar o fungo. No ensaio de sensibilidade ao fluconazol, as Concentrações Inibitórias Mínimas (CIMs) variaram entre 1,0 a 32 μg/mL. Entre os isolados testados, observou-se que um foi classificado como sensível, enquanto dois demonstraram resistência ao fluconazol. No que diz respeito aos compostos tiofênicos, não se verificaram alternâncias, com inibição observada em uma concentração de 200 μg/mL para alguns isolados. Foi evidente a capacidade de formação de biofilme por todos os isolados, embora com diferentes intensidades. Portanto, destaca-se atividade antifúngica dos derivados tiofênicos em relação aos isolados de Candida, indicando seu potencial como uma potencial alternativa terapêutica para o tratamento de candidíase invasiva no futuro.