Investigação da resposta imune induzida por veneno de Bothrops erythromelas em cultura de células mononucleares infectadas com Trypanosoma cruzi

Abstract

A doença de Chagas (DC) é uma infecção causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi (T. cruzi) que é transmitido aos seres humanos e a outros mamíferos por insetos triatomíneos contaminados. A única terapia disponível para o tratamento da DC no Brasil é o Benzonidazol (Bz), porém, a eficácia desse fármaco é variável, pois induz uma resposta inflamatória e causa efeitos colaterais aos pacientes. Por outro lado, o Bz associado com outras drogas é capaz de aumentar a eficácia do tratamento. Neste contexto, o veneno de serpentes tem mostrado atividades tripanocidas, todavia, os mecanismos imunológicos ainda não foram esclarecidos. O presente estudo teve como objetivo investigar o efeito do veneno de Bothrops erythromelas (B. erythromelas) sobre a resposta imune induzida em cultura de células mononucleares infectadas com formas tripomastigotas do T. cruzi e tratadas in vitro com o veneno da serpente através da detecção de citocinas (pró-inflamatórias e anti-inflamatórias). Sangue de indivíduos não portadores da doença de Chagas foi coletado em tubos de heparina para centrifugação por gradiente de densidade usando Ficoll-Hypaque onde as células mononucleares de sangue periférico (PBMC) foram separadas e infectadas com formas tripomastigotas Cepa Y de T. cruzi, seguida de adição do Bz e veneno de B. erythromelas às culturas. Após o tempo de cultivo, os sobrenadantes foram estocados para posterior análise das citocinas IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-γ e TNF por Citometric Beads Array (CBA). As células foram avaliadas por citometria de fluxo quanto à expressão das moléculas CD28⁺ e CTLA-4⁺ (em linfócitos T CD4⁺ e CD8⁺) e das moléculas CD80⁺, CD86⁺ e HLA-DR⁺ (em monócitos CD14⁺). Quanto à produção de citocinas os resultados mostraram que o veneno diminuiu a expressão de citocinas em todas as condições de ensaio em comparação aos controles. Porém, o tratamento com veneno induziu aumento da expressão de CD28⁺ em linfócitos TCD4+; e em monócitos CD14⁺, aumento da expressão das moléculas de ativação CD80⁺ e HLA-DR⁺ demonstrando que o veneno induz ativação dessas células. Por outro lado, o veneno induziu aumento da expressão de CTLA-4⁺ em linfócitos TCD4⁺ e TCD8⁺ indicando que pode conduzir a um controle da ativação exacerbada dessas células.