Desenvolvimento de sistema eletroquímico de DNA para detecção rápida de Leishmania sp.

Abstract

A leishmaniose é um grupo de doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania, que afetam cerca de 12 milhões de pessoas em todo o mundo, sendo considerada como um problema de saúde pública mundial. Estratégias como diagnóstico e tratamento precoces podem interromper o ciclo de transmissão da doença. Biossensores eletroquímicos de DNA têm sido referidos como um método diagnóstico muito atrativo, devido à sua alta sensibilidade, seletividade, facilidade de utilização portabilidade e compatibilidade com técnica de análise eletroquímica. Este estudo teve como objetivo desenvolver um sistema eletroquímico utilizando eletrodo de grafite modificado com sequência de DNA de Leishmania sp. (sonda) para a detecção de Leishmania sp. A detecção foi feita por análise da oxidação eletroquímica do sinal de guanina na superfície do eletrodo por meio da técnica de voltametria de pulso diferencial. Inicialmente, foi realizado o pré-tratamento do eletrodo de trabalho, visando a otimização do processo de imobilização da sonda. Em seguida, a sonda foi imobilizada na superfície do eletrodo, onde se verificou que a concentração de 0.5 μM era ideal para a imobilização. O processo de hibridação com a sequência alvo apresentou as seguintes características: faixa de linearidade de 0.035 μM a 0.5 μM, limite de detecção de 22.4 pM, limite de quantificação de 74.73 pM e desvio padrão relativo de 1.09 %. A seletividade foi analisada pelo processo de hibridação com diferentes sequências de ácidos nucléicos: alvo, não complementar e mix (alvo e não complementar), onde hibridação foi observada apenas com o alvo ou o mix. Portanto, através de estudos iniciais, o biossensor mostrou uma alta sensibilidade e seletividade para sequência alvo. No futuro, este biossensor pode ser capaz de contribuir para a detecção de Leishmania sp.