DESENVOLVIMENTO DE UMA PLATAFORMA in vitro PARA AVALIAÇÃO DO EFEITO DOS ONCOGENES DO HPV EM CÉLULAS DE CARCINOMAS VARIADOS VIA SISTEMA LENTIVIRAL

Abstract

O Papilomavírus Humano (HPV) é um vírus oncogênico associado ao desenvolvimento de diferentes tipos de câncer, sendo o principal agente etiológico do câncer cervical. Suas oncoproteínas E5, E6 e E7 interferem no ciclo celular ao inativar proteínas reguladoras, como p53 e pRb, favorecendo processos de transformação celular e carcinogênese. Estudos recentes demonstraram a presença de DNA do HPV em outros tecidos, possivelmente devido à sua disseminação por vias linfáticas e hematogênicas; entretanto, a relação entre o HPV e outros tipos tumorais ainda não está completamente elucidada. Diante disso, este projeto teve como objetivo construir uma plataforma in vitro para avaliar a atividade dos oncogenes E5, E6 e E7 do HPV16 por meio de um sistema lentiviral, capaz de promover a integração do gene de interesse ao genoma celular e permitir sua expressão estável em linhagens de células humanas. Inicialmente, os oncogenes foram clonados individualmente no vetor de passagem pGEM-T Easy, transformados em Escherichia coli e posteriormente subclonados no vetor de expressão lentiviral pCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro CD713B-1 (pMEG). A produção das partículas lentivirais foi realizada por meio da transfecção de células HEK-293T. Para isso, os vetores auxiliares VSV-G e ΔR8.2 foram co-transfectados com o vetor de transferência nas células produtoras (HEK-293t). A confirmação da produção lentiviral foi realizada por microscopia de fluorescência, por meio da detecção da expressão da proteína verde fluorescente (GFP), indicando sucesso na transfecção e na geração das partículas virais recombinantes contendo os oncogenes do HPV-16. Essa plataforma poderá ser utilizada, posteriormente, em outros estudos que envolvam a transdução celular de carcinomas variados não anogenitais associados ao HPV.