Potencial Modulador de Meio Condicionado de Células Neoplásicas Pancreáticas tratadas com Folfirinox e Gencitabina sobre Macrófagos

Abstract

O adenocarcinoma ductal pancreático (PDAC) é um tumor altamente agressivo, cuja progressão e resistência terapêutica são influenciadas pelo microambiente tumoral e pela interação das células neoplásicas com macrófagos associados ao tumor. Este estudo investigou os efeitos da comunicação entre células neoplásicas de PDAC e macrófagos M0 por meio de fatores solúveis (meio condicionado- MC) no contexto do tratamento com Folfirinox e Gencitabina. Para tal, o MC das linhagens celulares BxPC-3, PANC-1 e MIA PaCa-2 foram obtidos após tratamentos com 5-fluorouracil, irinotecano e oxaliplatina (F10) e Gencitabina (G10) na concentração de 10 μM e analisado quanto à presença de citocinas, aos efeitos sobre marcadores de superfície celular e a atividade fagocitária dos macrófagos M0, além da análise de arranjo de proteínas do MC proveniente de macrófagos em contato com MC de PANC-1. Como resultados, os dados provenientes de coorte de indivíduos diagnosticados com PDAC foram utilizados para análises da associação entre o perfil de expressão gênica e o desfecho clínico após tratamento quimioterápico. RANTES foi regulado negativamente após incubação com MC – BxPC-3 G10 5x e, regulado positivamente após exposição ao MC–CTL 5x e MC-F10 5x. O MC- PANC-1 G10 5x regulou positivamente os níveis de IP-10. O MC da linhagem MIA PaCa-2 demonstrou maiores níveis de IL-8 no MC- G10 5x, ainda demonstrou que níveis de IL-4 estiveram aumentados no MC- CTL 5x comparado ao MC- CTL 1x, F10 5x e G10 5x. A normalização dos níveis das citocinas e quimiocinas, demonstrou maior detecção de RANTES após MC- BxPC-3 F10 e MC – PANC-1 G10 na densidade 5x, predomínio de IL-8 no MC – BxPC-3 e MC- MIA PaCa-2 para o tratamento com G10 5x, e IL-4 no MC – BxPC-3 G10 5x. Os dados in sílico revelaram que maiores níveis de RANTES, IL-8 e IL-6 em pacientes com PDAC após tratamento quimioterápico estão associados a menor probabilidade de sobrevivência. O MC de linhagens do PDAC expostas ao tratamento não induziu alterações imunofenotípicas significativas em macrófagos M0. Com relação a atividade funcional, o MC- BxPC-3 na presença G10 5x comparado aos MC- G10 1x e MC- CTL 1x reduziu a atividade fagocítica de macrófagos. O MC – PANC-1 F10 e G10 reduziu a fagocitose independente da densidade celular avaliada. O MC- PANC-1 F10 regulou positivamente a secreção de IL-8 e MCP-1, enquanto o MC – PANC-1 para ambos quimioterápicos e regulou negativamente a secreção de GRO, GROα, osteopontina, osteoprotegerina, TIMP-1 e TIMP-2 em macrófagos M0. Em conjunto, os resultados do presente estudo revelam que, em resposta ao tratamento com Folfirinox e Gencitabina, as células tumorais pancreáticas regulam a atividade fagocítica e imunomoduladora de macrófagos M0 através de uma série de fatores solúveis condicionados por características microambientais e genéticas das linhagens tumorais avaliadas.