Desenvolvimento e avaliação de novos antígenos recombinantes aplicáveis ao diagnóstico e monitoramento da Leishmaniose Visceral Humana e Canina

Abstract

A Leishmaniose Visceral (LV) é uma doença negligenciada grave que acomete diversos mamíferos. Atualmente, a eficácia das ações do SUS é limitada pela dependência de tecnologias importadas e métodos diagnósticos onerosos, que demandam infraestrutura laboratorial complexa. Frente a esse cenário, o desenvolvimento de testes mais acessíveis, eficazes e de produção nacional torna-se essencial para se ampliar o acesso ao diagnóstico, à vigilância e ao controle de doenças. Investigações prévias identificaram proteínas recombinantes com desempenho diagnóstico superior ao padrão-ouro atual (rK39); contudo, os antígenos Lci6 e Lci8 ainda não foram integralmente validados. Assim, a reavaliação dessas proteínas surge como uma alternativa promissora para otimizar a vigilância e o manejo clínico da LV em humanos e cães. Este projeto teve como objetivo avaliar a eficiência diagnóstica de antígenos previamente identificados pelo grupo de pesquisa em testes sorológicos de ELISA, voltados para a LV canina (LVC) e LV humana (LVH). Para o estudo, a proteína Lci6 foi segmentada nos domínios NT (55kDa), Meio (59kDa) e CT (69kDa), enquanto a Lci8 (74kDa) foi truncada e sintetizada quimicamente. Após predição de epítopos, os fragmentos foram amplificados por PCR, clonados e validados por sequenciamento. A expressão heteróloga em Escherichia coli foi otimizada em baixas temperaturas (18°C e 30°C) para evitar a formação de corpos de inclusão. Para a recuperação dessas proteínas, utilizou-se solubilização com ureia (4M ou 8M), seguida de purificação por cromatografia de afinidade e quantificação por curva de BSA. Por fim, a padronização do ELISA indireto foi realizada através de uma titulação em checkerboard, definindo concentrações de revestimento (25 a 600 ng) e diluições de soro (1:100 a 1:1600) que maximizaram a densidade óptica e a especificidade diagnóstica, com um ponto de corte estabelecido estatisticamente pela média dos controles negativos acrescida de dois desvios padrão. Espera-se que esta etapa contribua para o aprimoramento do diagnóstico da LV no Brasil, promovendo testes mais sensíveis, acessíveis e adaptados às condições locais.