Atividade antifúngica de compostos derivados de tiofenos frente a espécies de Candida

Abstract

O gênero Candida compreende um grupo com diversas espécies de leveduras, que podem ser comensais ou patogênicas para os seres humanos. Nos últimos anos, há um aumento no número de infecções ocasionadas por espécies de Candida, como também o crescimento no número de cepas resistentes aos antifúngicos convencionais utilizados na prática clínica, assim, limitando a disponibilidade de opções para o tratamento e contribuindo para um pior prognóstico do paciente. Além disso, esses antifúngicos apresentam significativa toxicidade e efeitos colaterais, como também variação em sua eficácia frente às espécies. Desta maneira, torna-se fundamental a pesquisa por novas moléculas que possuam eficiente inibição contra o crescimento fúngico, especialmente, de cepas resistentes. Nesse contexto, os derivados tiofenos são compostos heterocíclicos que possuem atividade in vitro contra espécies de leveduras e fungos filamentosos. Com base no exposto, este trabalho teve como objetivo avaliar o potencial farmacológico de novos compostos derivados de tiofeno frente às espécies de Candida, estocados na Coleção de Culturas Micoteca URM/UFPE. Para a análise, foram selecionados 25 isolados das espécies de Candida. Em seguida, os isolados foram semeados em Meio Ágar Sabouraud e realizadas a autenticação taxonômica das espécies através do sequenciamento parcial do gene da região LSU 28S do rDNA. Bem como, foram submetidos aos testes de susceptibilidade antifúngica frente ao fluconazol e aos compostos derivados de tiofeno (6CN, 7CN, 5B200 e 7CN12) pelo método de microdiluição em caldo para a determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM), como também, o teste de tabuleiro de xadrez, no qual foram testados ambos em associação, para a determinação da Concentração Inibitória Fracionada (FIC). Além disso, foi realizado a visualização das estruturas celulares fúngicas por meio da microscopia eletrônica de transmissão para análise dos prováveis aspectos de ação ocasionados pelos derivados tiofeno. A identificação molecular demonstrou que mais de 60% das espécies foram divergentes da identificação fenotípica prévia. Para os testes com o fluconazol, constataram 5 isolados resistentes de Candida não-albicans. Os compostos 6CN e 7CN foram os derivados tiofenos que apresentaram resultados mais significativos de inibição do crescimento fúngico, com variações de CIM entre 16μg/mL à 1024 μg/mL. A ação do fluconazol em

combinação com os compostos 6CN e 7CN demonstraram interação sinérgica em mais de 60% e 80% dos isolados, respectivamente. A visualização no microscópio eletrônico de transmissão demonstrou alterações celulares como irregularidades da membrana plasmática e nuclear, espessamento da membrana plasmática e intensa vacuolização do citoplasma. Portanto, conclui-se que as cepas de Candida albicans apresentaram sensibilidade ao fluconazol e as espécies Candida pseudohaemulonii, Candida haemulonii e Candida parapsilosis stricto sensu apresentaram resistência. Ademais, foi verificado que os compostos derivados de tiofeno testados demonstraram maior ação fungistática do que fungicida. A interação sinérgica entre as moléculas evidenciou que a associação dos dois compostos resultou em um efeito maior de inibição do crescimento fúngico do que a inibição apresentada individualmente. A microscopia eletrônica de transmissão demonstrou que os derivados tiofenos apresentaram ação significativa na estrutura da célula fúngica, com visualização pela primeira vez da ocorrência de intensa vacuolização citoplasmática, indicando apoptose celular.