Investigação da atividade antifúngica, antibiofilme e efeito combinatório com fluconazol da lectina coagulante das sementes de Moringa oleifera (cMoL) contra Cryptococcus

Abstract

Moringa oleifera é uma planta originária do sul da Ásia e amplamente cultivada no Brasil. As sementes dessa planta têm recebido grande destaque por serem empregadas para o tratamento da água para consumo humano devido à presença de proteínas catiônicas, incluindo lectinas. Lectinas são proteínas de origem não imunológica capazes de formar ligações reversíveis e específicas com carboidratos e, por isso, têm sido referidas como bons agentes antimicrobianos contra bactérias e fungos. Dentre as proteínas coagulantes encontradas nas sementes está a lectina cMoL (coagulant M. oleifera lectin). Estudos prévios apontaram atividade anticâncer, inseticida e antiparasitária para essa proteína. A criptococose é uma doença causada por fungos do gênero Cryptococcus, acometendo principalmente indivíduos imunossuprimidos. A Organização Mundial da Saúde (OMS) categorizou Cryptococcus neoformans no grupo crítico da lista de patógenos fúngicos prioritários. O objetivo do presente estudo foi investigar o potencial antifúngico da lectina cMoL contra C. gatti (R265) e C. neoformans (B3501 e H99). cMoL foi purificada a partir da obtenção de extrato salino, fracionamento proteico e cromatografia em coluna de gel de guar. A atividade antifúngica foi mensurada a partir do ensaio de microdiluição em caldo para determinação da concentração mínima que inibe 50% do crescimento fúngico (CMI) e a menor concentração capaz de reduzir o número de unidades formadoras de colônias em 99,9% em comparação com o inóculo inicial (CMF). O potencial antibiofilme foi determinado utilizando a coloração com cristal violeta. O efeito sinérgico entre cMoL e fluconazol foi avaliado a partir da determinação do índice de concentração inibitória fracionada (ICIF). O mecanismo de morte celular foi investigado utilizando citometria de fluxo. cMoL apresentou CMI de 7,5 µg/mL e CMF não foi detectado para todas as cepas testadas. A lectina não apresentou ação antibiofilme nos isolados testados. cMoL apresentou efeito sinérgico com fluconazol para C. neoformans H99 (ICIF ≤ 0,5) e antagônico para C. neoformans B3501 e C. gattii (ICIF > 2). Dados de citometria de fluxo demonstraram que cMoL reduziu o crescimento dos fungos a partir da promoção de necrose. O estudo revelou que a atividade antifúngica da cMoL envolve morte celular e que a lectina tem potencial uso em terapia combinada com fluconazol contra C. neoformans H99.