Avaliação de um Peptídeo Racionalmente Modificado Bioinspirado em uma Alfa-Hairpinina de Cenostigma pyramidale (Tul.) Gagnon & GP Lewis (Catingueira) com Potencial Antimicrobiano e Antiviral

Abstract

Os Peptídeos Antimicrobianos de Plantas (P-AMPs, Plant Antimicrobial Peptides) emergem como alternativas terapêuticas promissoras no tratamento de infecções provocadas por organismos multirresistentes, devido aos seus mecanismos antimicrobianos distintos e à sua atividade de amplo espectro, oferecendo vantagens em comparação com os antibióticos tradicionais. Nesse contexto, o presente estudo visou avaliar o potencial anti-SARS-CoV-2, antimicrobiano, citotóxico e genotóxico de um AMP racionalmente modificado (RAMP), inspirado em uma -hairpinina, identificada no transcriptoma de Cenostigma pyramidale (catingueira) (Cp_hp1). O RAMP foi sintetizado e investigado quanto à sua atividade anti-SARS-Cov-2, analisando a citotoxicidade e efeito antiviral pós-tratamento de sete concentrações seriadas do peptídeo (16 a 1024 μg/mL), utilizando os ensaios de Brometo de 3-[4,5-dimetil-tiazol-2-il]-2,5- difeniltetrazólio (MTT), TCID50 e qPCR (CC20), em células Vero (CCL81). Quanto à atividade antibacteriana contra cepas de Staphylococcus aureus (ATCC 25923) (Gram positiva), Klebsiella pneumoniae (ATCC 13883) e Acinetobacter baumannii (ATCC 19606) (ambos, Gram negativas), foi realizada a determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM). Além disso, foi avaliada a atividade antifúngica contra Candida albicans (URM 5901), Candida glabrata (URM 4246), Cryptococcus neoformans (B3501) e Cryptococcus gattii (R265). A citotoxicidade e a genotoxicidade do Cp_hp1 foram investigadas pelos testes de MTT (16 a 1024 μg/mL) e de Micronúcleo com Bloqueio de Citocinese (CBMN) (128; 256 e 512 μg/mL), respectivamente, usando linhagem celular Vero (ATCC CRL-1586). Os valores de CC50 (250,2 μg/mL), CC20 (84,31 μg/mL), IC50 (8,682 μg/mL) e índice de seletividade (28,80) indicam que Cp_hp1 apresenta atividade anti-SARS-CoV-2, demostrando efeito inibitório contra o SARS-CoV-2 (CC20 a CC20/4) quando administrado após a infecção. A redução da infecção viral foi acompanhada pela diminuição dos níveis de cópias de RNA, sugerindo que o RAMP inibe o SARS-Cov-2 na etapa de replicação. O RAMP exibiu CIM para S. aureus, A. baumannii e K. pneumoniae nas concentrações de 256, 256 e 1024 μg/mL, respectivamente. Adicionalmente, apresentou ação antifúngica em C. albicans e C. glabrata, com ação inibitória e fungicida igual ou superior a 1024 μg/mL. Nas cepas C.

neoformans e C. gattii, foi observada ação inibitória na concentração de 256 μg/mL e 64 μg/mL, respectivamente. O efeito fungicida foi detectado na concentração de 512 μg/mL para ambas as cepas de Cryptococcus. Adicionalmente, observou-se ausência de citotoxicidade e de genotoxicidade para as concentrações testadas igual ou menor que 256 μg/mL. Em suma, os dados indicam que o Cp_hp1 apresenta atividade anti-SARS-Cov-2 e evidenciam potencial antibacteriano e antifúngico nas cepas estudadas. Esses resultados, associados à ausência de cito- e genotoxicidade, sugerem um potencial promissor para este RAMP como um novo agente terapêutico de amplo espectro.