Estudo da extração de invertase de Saccharomyces cerevisiae

Abstract

A invertase é uma enzima importante tanto no aspecto industrial, para a área alimentícia, evitando a cristalização do açúcar, quanto no metabolismo de diversos organismos, sendo responsável pela hidrólise da sacarose em frutose e glicose. Este último açúcar representa o principal combustível para a produção de energia em organismos, gerando ATP e NADH. A invertase pode ser localizada principalmente em três estruturas: no citoplasma, nos vacúolos e na parede celular, sendo esta última a mais extraída em laboratórios pelo método de extração química utilizando a levedura Saccharomyces cerevisiae. O presente trabalho teve por objetivo analisar o efeito do tempo de contato da solução de extração com a levedura liofilizada sobre a recuperação da invertase. A levedura S. cerevisiae comercial liofilizada foi colocada em contato com uma solução de extração, bicarbonato de sódio 0,1 M por diferentes intervalos de tempo (entre 0,5 h e 29,5 h), sendo centrifugadas ao final para separação do sólido e do líquido (lisado). Cada uma dessas amostras foi submetida a testes analíticos, a fim de observar a cinética da extração, podendo assim identificar possíveis etapas ocorridas ao longo do procedimento. Foi constatada, a partir da análise de açúcares redutores, uma atividade enzimática semelhante ao longo de todo intervalo de tempo, indicativo da rápida liberação da enzima presente associada à membrana da célula. Entretanto, o meio se encontrava com alto teor de impurezas, o que resultava em interferências nas análises. Essa situação foi superada deixando o lisado na estufa a 45 °C por período superior a 5 h, representando assim uma fase de purificação da invertase, etapa fundamental para a utilização da enzima, visto que a presença de tais impurezas no meio impossibilita a correta determinação da atividade enzimática. Este trabalho destacou o valor do desenvolvimento contínuo de todo o conhecimento adquirido ao longo do curso, como também reforçou a importância das experiências anteriores para a compreensão e resolução de problemas futuros.