Desenvolvimento de metodologia analítica e validação para quantificação de Praziquantel e Epiisopiloturina em associação dose fixa para tratamento da Esquistossomose

Abstract

A esquistossomose é uma doença que afeta milhões de pessoas no mundo e o tratamento ativo para essa patologia é o praziquantel (PZQ) que possui baixa solubilidade e atua apenas contra a forma adulta do parasita Schistosoma mansoni. Como alternativa terapêutica têm-se a epiisopiloturina (EPI), um alcalóide que possui atividade esquistossomicida contra as formas jovens e adultas do parasita em questão, entretanto, esta também possui o mesmo inconveniente biofarmacêutico. A combinação de fármacos em um único medicamento, traz inúmeros benefícios e quando ocorre em uma razão de dose fixa, possui a necessidade de se obter métodos analíticos eficientes, que identifiquem e quantifiquem adequadamente os insumos farmacêuticos ativos (IFAs), utilizados na combinação. Assim, este trabalho teve o objetivo de desenvolver e validar uma metodologia analítica para quantificação do IFA sintético (PZQ) e fitofármaco (EPI), carreados aos adjuvantes (HDL) e (HPβCD). Os métodos analíticos foram desenvolvidos por Cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), com detector de arranjo de diodos (DAD), procedendo de um método inicial, foi executado as seguintes condições cromatográficas: Coluna Shimadzu® C18 (250 x 4,6 mm x 5 μm). Fase móvel (FM): Gradiente Acetonitrila: Água com ácido fosfórico 0,1% (55:60) no tempo de 15 minutos. Fluxo: 0,6 mL/min; temperatura do forno 30°C; detecção: 210 nm; volume de injeção: 10 μL. Na concentração de 200 ug/mL. Dentro dessas condições o tempo de retenção dos fármacos foram: EPI: 3,4 minutos e PZQ: 10,6 minutos. Posteriormente, diversas modificações foram efetuadas a fim de otimizar a metodologia analítica, portou-se em otimizar a metodologia analítica utilizando a coluna Shimadzu® C18 (250 x 4,6 mm x 5 μm) com a FM: Gradiente Metanol:ácido fosfórico 0,1% (20:80); no tempo de 25 minutos. Fluxo: 1,0 mL/min; temperatura do forno 30°C; detecção: 220 nm; volume de injeção: 20 μL. Na concentração da amostra de: 200 ug/mL. Tempo de retenção dos fármacos: EPI: 4,5 minutos e PZQ: 14,7 minutos. A metodologia analítica de quantificação expressou resultados apropriados de área, resolução, fator de cauda e simetria do pico, sendo então designada para validação a fim de avaliar a conformidade dos resultados e se estes estão de acordo com as especificações dos órgãos de regulamentação; foi validado de acordo com a RDC 166/2017, utilizando os parâmetros de validação que são a seletividade/ especificidade, linearidade, precisão, exatidão, limite de detecção e quantificação e robustez, atestando que o mesmo é adequado ao produzir resultados confiáveis ao fim a que se destina.