Implementação do diagnóstico molecular por NESTED PCR para esporotricose humana

Abstract

A esporotricose é uma infecção granulomatosa cujo o diagnóstico padrão-ouro é o isolamento de Sporothrix sp. em meios de cultura, todavia, é um método dependente do desenvolvimento fúngico, assim, pode levar semanas para ser concluído, além disso, é suscetível de contaminação. Neste sentido, métodos moleculares como a Nested PCR têm se destacado no manejo de diversas infecções, visto que é uma ferramenta para a identificação rápida e precisa de microrganismos, seja a partir de uma cultura pura ou diretamente em amostras biológicas. Diante do exposto, o objetivo do estudo foi aplicar um protocolo molecular de Nested PCR para a detecção e identificação rápida de Sporothrix sp. em amostras biológicas de pacientes com esporotricose. Variáveis clínicas e epidemiológicas foram descritas a partir da análise dos prontuários. Foram incluídos no estudo, 12 pacientes onde sete (58,3%; n=7/12) eram homens. A idade média dos pacientes foi de 44 anos. Dentre os casos de esporotricose, a forma disseminada foi diagnosticada em 33,3% (n=4/12) dos pacientes, além disso, a hipertensão arterial sistêmica e o HIV foram associados a esta infecção. Com relação a fonte de infecção, 75,0% (n=9/12) dos pacientes relataram contato com gatos por meio de arranhadura ou mordedura. Treze amostras, seis de biópsias cutâneas, cinco de exsudados cutâneos e duas de secreção conjuntival, foram obtidas de pacientes com esporotricose. O sequenciamento do gene da calmodulina identificou todos os isolados como S. brasiliensis. A Nested PCR foi capaz de detectar todos os Sporothrix sensu lato diretamente das amostras clínicas e a cepa de referência CBS 120339. Diante disso, a Nested PCR constitui uma estratégia valiosa para a detecção e identificação de Sporothrix sp. diretamente em amostras clínicas, complementando o método de referência e permitindo uma alternativa mais rápida à cultura.