Avaliação do perfil de células natural killer e natural killer t like e seus marcadores de citotoxicidade após estimulação antigênica específica em pacientes com leishmaniose tegumentar americana

Abstract

A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma doença infecciosa com ampla ocorrência em vários continentes, causando deformidades e afetando mais de 12 milhões de indivíduos globalmente. Sua alta incidência está ligada a condições socioeconômicas precárias e fatores como mudanças climáticas e urbanização. É causada por parasitas do gênero Leishmania e pode afetar a pele e mucosas de maneira severa. O sistema imunológico do hospedeiro desempenha um papel importante na resposta à infecção por Leishmania spp. Células como a Natural Killer (NK) e Natural Killer T (NKT) têm sido objeto de estudo acerca do seu real papel na LTA, já que sua função nesse contexto ainda não está completamente esclarecida. Enquanto algumas pesquisas sugerem um papel protetor das células NK, outras indicam sua possível influência na exacerbação das lesões. Moléculas de ativação, como NKG2D, NKp46 e CD127, também influenciam a resposta imune e na atividade dessas células em diversas infecções. Este trabalho buscou avaliar o perfil das células NK e NKT like, bem como destas moléculas de ativação, em pacientes com LTA. O objetivo foi entender melhor o desenvolvimento da doença e fornecer informações para diagnóstico, tratamento e manejo clínico mais eficazes. Pacientes com LTA foram acompanhados ao longo do tempo, e a resposta imunológica de suas células NK e NKT like foi analisada antes e após a cicatrização das lesões. Para o estudo, foi formado um grupo de pacientes com lesão ativa (AT, N=11), um grupo de pacientes com cura clínica (PT, N = 5), e um grupo controle de indivíduos saudáveis (CT, N = 11). Foram realizados exames laboratoriais para confirmar a doença. As células mononucleares do sangue periférico dos pacientes foram estimuladas com o antígeno de Leishmania braziliensis para observar a resposta imunológica. Foram realizadas análises por citometria de fluxo para identificar e quantificar as populações celulares de NK e NKT like, bem como para avaliar a expressão dos marcadores CD127, NKp46 e NKG2D nas amostras. A análise estatística dos dados foi realizada utilizando o software GraphPad Prism 7, o teste Shapiro-Wilk foi aplicado para verificar a normalidade dos dados. Os dados com distribuição normal foram analisados através do teste t student e os que não apresentaram normalidade o test U de Mann- Whitney foi empregado. Todas as conclusões foram baseadas no nível de significância de 5% (p < 0,05). Foi possível observar uma prevalência de mulheres com lesão ativa com média de 36 anos residentes de áreas endêmicas. Após cultivo com antígenos de Leishmania braziliensis foi possível observar que a população de células NK (CD16-) foi maior na população controle, mas seu perfil nos pacientes demonstrou ser mais citotóxico pelo aumento da expressão dos marcadores CD127 e NKG2D. Os grupos AT e PT também demonstram aumento dos marcadores NKp46, NKG2D e CD127 na população de células NK (CD16+). Sugerindo que pacientes previamente expostos apresentam um perfil citotóxico mais proeminente e o provável envolvimento da IL-7 na ativação e sobrevivência das células NK e NKT por conta do aumento dos marcadores citados. Foi possível observar aumento de células NKT CD8+ com uma maior expressão de NKp46 no grupo PT e aumento de CD127 nos grupos AT e PT . Já as células NKT CD4+ dos pacientes AT e PT demonstraram aumento do NKp46. A ativação desses perfis celulares e o aumento dos marcadores de citotoxicidade são importantes indicadores da ativação das células mediante a infecção pelo parasita e sua consequente eliminação. Os resultados deste estudo contribuirão para o entendimento mais aprofundado da resposta imune na LTA, facilitando o desenvolvimento de futuras terapias para a doença.