Extração e avaliação do comportamento da imunoglobulina G comercial utilizando sistemas de duas fases aquosas

Abstract

As imunoglobulinas (Igs) é hoje o produto que direciona a indústria de hemoderivados. Atualmente no Brasil, a procura pelas Igs vem aumentando bastante devido ao aumento de casos de distúrbios autoimunes, sendo o uso dessas Igs fundamental ao seu tratamento. A imunoglobulina G comercial (IgGc), usada largamente em tratamentos, ainda apresenta um pequeno grau de impureza. A principal metodologia de obtenção dessas proteínas plasmáticas é conhecida como "fracionamento do plasma com etanol frio", entretanto devido a sua alta concentração de etanol e baixo pH, essa provoca a desnaturação das proteínas. Nesse sentido, o sistema de duas fases aquosas (SDFA) vem como uma alternativa de metodologia que permite um ambiente aquoso (85% - 99% de água) que acarreta a obtenção e purificação de biomoléculas em condições não desnaturantes. Extrair e purificar imunoglobulina G comercial (IgGc) por SDFA e estudar a recuperação e o particionamento da biomolécula foi um dos objetivos do estudo, além de verificar a presença de anticorpos contra o vírus da Zika nas preparações de IgGc. As Igs utilizadas na presente pesquisa foram oriundas da Empresa Brasileira de Hemoderivados e Biotecnologia (HEMOBRÁS). Para o SDFA foi utilizado um planejamento fatorial 22 onde foram avaliadas a concentração do polietilenoglicol (PEG) de 4000 g/mol e a concentração do sal (fosfato de potássio) sobre a extração das imunoglobulinas, tendo como variáveis de resposta: o coeficiente de partição (K) e a recuperação (Y) das imunoglobulinas extraídas. Os resultados mostraram que o comportamento de partição das Igs dependeu diretamente da concentração de PEG e da concentração do sal utilizado. O ensaio que promoveu a maior recuperação da biomolécula (Y=96,79%) foi obtido com o sistema PEG 4000 (12,5%) com uma concentração de fosfato de potássio de 10%, tendo as imunoglobulinas uma partição preferencial para a fase sal (K=0,15). O perfil eletroforético das proteínas também demonstrou que após o particionamento a IgGc ficou mais pura. Dessa forma o SDFA se mostrou uma técnica eficiente na extração e purificação de imunoglobulinas, com um baixo custo e um alto rendimento.