Avaliação dos efeitos de um microambiente pró-inflamatório e de sua associação com fármacos em células de câncer de pulmão

Abstract

O câncer de pulmão é um dos mais incidentes globalmente e o responsável pelo maior número de óbitos por câncer. No Brasil, são estimados 32 mil novos casos de carcinoma pulmonar para cada ano do triênio 2023-2025. O tumor se desenvolve em um microambiente extremamente complexo, onde a inflamação desempenha papel fundamental nos processos de tumorigênese e progressão tumoral. O microambiente tumoral é majoritariamente anti-inflamatório, possuindo uma população de macrófagos M2 que expressam citocinas que favorecem a remodelagem do tecido, de forma que favoreça o crescimento do tumor. No Brasil, o esquema quimioterápico padrão para o câncer de pulmão de células não pequenas é a associação de cisplatina e etoposido. No entanto, a resistência à platina e seus derivados é a principal limitação no tratamento, assim como os efeitos colaterais. Os meios condicionados por macrófagos podem apresentar diferentes citocinas, quimiocinas e fatores de crescimento, tornando possível estudar, in vitro, o efeito dessas moléculas em diversos tumores. Nos últimos anos, vem surgindo imunoterapias voltadas para os macrófagos associados ao tumor, esses tratamentos podem agir no recrutamento, sobrevivência e repolarização de macrófagos. Nesse contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar in vitro os efeitos do microambiente pró-inflamatório no câncer de pulmão isolado ou associado à cisplatina, importante para um melhor entendimento da importância da inflmação no contexto da neoplasia pulmonar, além de propor um modelo para estudo in vitro para novas opções terapêuticas. Para avaliar a citotoxicidade após exposição ao meio condicionado, foi realizado o ensaio colorimétrico de viabilidade celular baseado na conversão do sal MTT. Foi ainda avaliado a ação deste meio condicionado no ciclo celular através de citometria de fluxo, onde as células foram marcadas com Iodeto de Propídeo e analisadas pelo software FlowJo. Para avaliar os genes de morte relacionados aos efeitos do meio condicionado, foi realizada PCR em tempo real onde o DNA complementar (cDNA) foi utilizado para avaliar a expressão dos genes caspase 3, BAX e Caspase 1 pelo método TaqMan. A análise dos dados foi realizada pelo GraphPad Prism 8 e os valores de p<0,05 foram considerados significativos. A exposição das linhagens de carcinoma pulmonar ao meio condicionado pró-inflamatório resultou na redução significativa da viabilidade celular (p<0,05), na H1299 essa redução foi de 61,29%, na A549 essa redução foi de 59,43%. Além disso, a exposição do meio condicionado em associação a cisplatina, potencializou a ação do quimioterápico no ciclo celular da linhagem H1299, parando as células na fase G0/G1. Os resultados da expressão gênica mostraram que a exposição ao meio condicionado não foi capaz de modular a expressão dos genes BAX e Caspase 3 e Caspase-1. Porém, no grupo exposto ao meio condicionado em associação a cisplatina foi possível observar um aumento da expressão de caspase-1, gene relacionado a piroptose. Assim, os resultados deste estudo sugerem que uma presença de mediadores liberados por macrófagos M1, potencializa a ação da cisplatina na viabilidade e ciclo celular de células de carcinoma pulmonar, a via de morte relacionada precisa ser melhor avaliada.