Avaliação in vitro do potencial terapêutico dos extratos bioativos de microrganismos fotossintetizantes frente a diferentes espécies de Leishmania spp.

Abstract

Diante das limitações no atual tratamento das leishmanioses, há uma busca crescente por novos compostos com potencial terapêutico. Alvos de origem natural estão sendo estudados, incluindo alguns microrganismos fotossintetizantes (MFs), nos quais já foi observado potencial imunomodulador e antiparasitário, além de apresentarem uma ampla diversidade química e metabólica, tornando-os fontes de substâncias ativas que podem ser utilizadas no tratamento de diversas doenças. O estudo teve como objetivo avaliar in vitro o potencial terapêutico dos extratos bioativos de MFs em diferentes espécies de Leishmania spp. Após o cultivo das espécies Arthrospira platensis (EAP), Chlorella vulgaris (ECV), Dunaliella tertiolecta (EDT) e Tetradesmus obliquus (ETO), os extratos foram obtidos pelo método de sonicação. Células mononucleares do sangue periférico (PBMC) de humanos saudáveis foram tratadas com os extratos para determinação da concentração citotóxica de 50% (CC50) através de ensaios de viabilidade celular. Por sua vez, formas promastigotas de Leishmania infantum e L. braziliensis foram tratadas para determinação da concentração inibitória de 50% (IC50) através de contagem celular. Os índices de seletividade (IS) foram determinados pela razão entre o valor da CC50 e IC50. As drogas de referência (DRs) utilizadas para comparação foram o Antimoniato Pentavalente (SbV) e a Miltefosina (MTF). Além disso, a atividade imunomodulatória foi avaliada a partir da dosagem de citocinas (IFN-γ, TNF, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10) e da produção de óxido nítrico (NO) em sobrenadantes da cultura de PBMC humano tratados com EAP e EDT. Nos resultados obtidos, foi observado que o EAP e ECV apresentaram menor citotoxicidade (CC50= 986,11 µg/mL e 999,66 µg/mL, respectivamente) quando comparados ao SbV (CC50= 412,46µg/mL). Em comparação à MTF (CC50= 245,81µg/mL), todos os extratos apresentaram menor toxicidade. Na análise da IC50 para L. infantum, observou-se que o EDT apresentou a maior atividade antiparasitária (IC50= 53,75 µg/mL). Para L. braziliensis, o ECV apresentou o melhor resultado com uma IC50 de 144,93 µg/mL. Em relação as DRs, observou-se que a MTF possui uma alta ação leishmanicida para as duas espécies de Leishmania. Ao avaliar os IS dos extratos, o EDT (IS= 4,7) e ECV (IS= 5,2) foram os que apresentaram os melhores resultados. Em relação a produção de citocinas, foi observado que o EAP e o EDT induziram a produção de citocinas do perfil Th1 em todas as concentrações, além de induzir a produção de IL-10 de forma dose-dependente (p-value= 0,031). Ao analisar a correlação entre as citocinas estimuladas pelo extrato EAP, observou-se que nas concentrações da CC50 e ½ da CC50, o TNF e IL-4 obtiveram uma forte correlação negativa (r= -0,92) e positiva (r= 0,97), respectivamente. Avaliando a produção de NO, houve uma maior indução na maioria das concentrações quando comparado às células sem estímulo para os dois extratos estudados. Diante dos resultados, os extratos bioativos de MFs mostraram-se promissores, podendo se tornarem possíveis candidatos terapêuticos para as leishmanioses.