Riparina III associada a antimicrobianos : citotoxicidade, atividade antibacteriana, inibição e erradicação de biofilme

Abstract

O aumento da pressão seletiva bacteriana, bem como o uso indiscriminado e inadequado de antimicrobianos proporcionam a identificação recorrente de isolados clínicos multidroga-resistente (MDR) envolvidos em Infecções Relacionadas à Assistência à Saúde (IRAS) e redução das opções terapêuticas. Habitualmente, ademais dos mecanismos de resistência aos antimicrobianos convencionais, diversas espécies bacterianas são descritas como formadoras de biofilme, como Staphylococcus aureus e Acinetobacter baumannii, sendo este um dos principais fatores de virulência. Como a terapia combinada entre antimicrobianos pode resultar em um efeito antagônico ou indiferente, além do fator de toxicidade elevado, por isso a investigação da combinação entre composto natural de origem vegetal e antimicrobiano vem sendo amplamente discutida, devido às diversas atividades biológicas, fácil acesso e baixo custo. Logo, o objetivo deste estudo foi investigar a citotoxicidade da riparina III associada a antimicrobianos e avaliar sua atividade antibacteriana, inibitória e erradicatória do biofilme e as possíveis alterações ultraestruturais em isolados clínicos multidroga-resistentes (MDR) de A. baumannii e S. aureus. A concentração inibitória mínima (CIM) da riparina III e de cada antimicrobiano (ciprofloxacina, oxacilina, meropenem e colistina) foi determinada por microdiluição em caldo em isolados clínicos MDR. Pelo método do Checkerboard foi definido o tipo de interação das combinações e a análise da CIM reversa das combinações sinérgicas. O tempo de morte dos isolados clínicos MDR foi avaliado baseado apenas nas combinações sinérgicas nas respectivas espécies bacterianas. A combinação sinérgica foi investigada quanto sua ação hemolítica in vitro e os isolados clínicos MDR foram observados quanto às alterações ultraestruturais nas concentrações subinibitórias através da Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) e Transmissão (MET), além de submetidos à formação de biofilme, bem como a inibição e a erradicação do biofilme na presença da combinação sinérgica. Para os isolados 54 e 808 (A. baumannii), o Índice de Concentração Inibitória Fracionada (FICI) exibiu o efeito sinérgico na combinação riparina III/colistina, sendo observadas diversas alterações ultraestruturais nas células bacterianas. A ação hemolítica da combinação entre riparina III e colistina exibiu um baixo percentual hemolítico e os isolados clínicos avaliados foram classificados como forte formadores de biofilme e a combinação sinérgica inibiu e erradicou os biofilmes produzidos ambos os isolados de A. baumannii. A identificação de espécies bacterianas MDR envolvidas em IRAS tem limitado as opções terapêuticas; por isso, o uso da terapia combinada entre composto natural e antimicrobianos convencionais pode alterar a dose ideal com eficácia terapêutica, bem como diminuir o efeito tóxico dos antimicrobianos. Logo, a combinação entre a riparina III e colistina apresentou uma interação sinérgica contra isolados clínicos de A. baumannii MDR, com diminuição significativa da concentração ideal da colistina, além de exibir baixo percentual hemolítico, inúmeras alterações ultraestruturais, sendo capaz de inibir e erradicar o biofilme de A. baumannii. Assim, estas informações demostraram que a combinação entre riparina III e colistina pode ser uma opção promissora, visto o potencial antimicrobiano constatado pelas espécies bacterianas, a tornando bastante eficaz contra A. baumannii MDR.