Perfil fenotípico de resposta ao estresse em linhagens de Liquorilactobacillus Vini defectivas para o gene relA

Abstract

Liquorilactobacillus vini é uma bactéria ácido láctica encontrada na produção de etanol combustível no nordeste brasileiro que tem sido alvo de estudos pelo nosso grupo de pesquisa. A sobrevivência de L.vini aos agentes estressores presentes nas destilarias pode ser dependente da molécula sinalizadora (p)ppGpp, chamada de alarmônio, produzido pela proteína RelA que tem efeito pleiotrópico na resposta a estresse em bactérias. Por isso, o objetivo deste estudo foi determinar o papel do gene relA na resposta estringente em resposta a diferentes formas de estresse, assimilação de diferentes açúcares, homeostase da parede celular motilidade.Inicialmente foi realizado um estudo in silico da proteína relA e a via do (p)ppGpp em L.vini. Posteriormente, foram realizados ensaios de tolerância a diferentes formas de estresse através da determinação da concentração inibitória mínima (MIC), concentração bactericida mínima (MBC), curvas de crescimento em concentração sub -MIC e indução de tolerância cruzada e curvas de lise da parede celular. Além disso, foi realizada pela anotação dos genes de síntese de flagelo, microscopia de fluorescência e ensaio de motilidade nas cepas parental e relA-. L.vini apresenta uma proteína relA bifuncional e uma pequena sintase de alarmônio no genoma. A linhagem mutante ∆relA apresentou maior tolerância a estresse osmótico e sensibilidade ao ácido láctico em relação a linhagem parental, entretantoparede celular da linhagem mutante é muito mais frágil que na linhagem parental, indicando o papel da proteina RelA na biogênese da parede celular.Além disso, a deleção do gene relA também interferiu no padrão de consumo de diferentes açúcares e na motilidade celular, indicando o déficit energético do mutante . Esses dados indicam que o gene relA em L. vini tem um papel central na fisiologia indo além do esperado para um gene de resposta a estresse.