Aplicação de testes moleculares em amostras de swab oral e conjuntiva ocular de roedores silvestres e sinantrópicos para diagnóstico de Leishmania (Viannia) braziliensis em área endêmica de Pernambuco.

Abstract

As leishmanioses são um conjunto de doenças parasitárias antropozoonóticas responsável por acometer pele, mucosas e vísceras de grande relevância para saúde pública. Na região Nordeste do Brasil, a principal espécie transmissora da Leishmaniose tegumentar é a Leishmania (Viannia) braziliensis e diversos roedores têm sido considerados hospedeiros e possíveis reservatórios naturais da mesma, sendo os principais roedores: Nectomys squamipes, Necromys lasiurus e Rattus rattus. São animais que em geral não apresentam as manifestações clínicas da doença, pois apresentam uma relação de adaptação e equilíbrio entre parasito-hospedeiro associado a adaptação do vetor fazem a manutenção do ciclo biológico do protozoário nas áreas endêmica. O diagnóstico laboratorial da doença conta com métodos de coletas invasivos e de diagnóstico pouco sensível, visto isso, a busca pela inovação através de métodos de coleta não invasiva e aplicação de técnicas de diagnóstico mais sensíveis é ascendente dentro do campo da investigação epidemiológica em áreas endêmicas. O objetivo do estudo é avaliar o desempenho da Reação em cadeia de Polimerase (PCR) e PCR em tempo real (qPCR) em swabs de secreção oral e de conjuntiva ocular de roedores silvestres e sinantrópicos. O estudo foi realizado no município de Amaraji, Zona da Mata Sul do Estado de Pernambuco, nas localidades do Engenho Raiz de Dentro e Engenho Refrigério, áreas endêmicas da doença. Os roedores capturados foram devidamente identificados quanto a espécie, em seguida, anestesiados, coletadas as amostras e devolvidos a natureza. As amostras biológicas foram transportadas sob refrigeração e em seguida armazenadas em freezer a -20°C no Laboratório de Imunoparasitologia Serviço de Referência em Leishmanioses do Departamento de Imunologia do IAM-FIOCRUZ-PE. Foram cedidas pelo Serviço de Referência em Leishmanioses 71 amostras pareadas de swab de conjuntiva ocular e secreção oral, as quais foram submetidas previamente à extração do DNA, protocolo “in house”, seguida da PCR e qPCR. Na qPCR 21,1% (15/71) de swab de conjuntiva ocular e 5,6% (4/71) de swab secreção oral tiveram o alvo kDNA da Leishmania (Viannia) braziliensis detectado, na PCR não houve detecção do alvo do parasito. Estatisticamente a qPCR apresentou significância (p<0,05) podendo ser considerada mais sensível que a PCR Convencional principalmente ao utilizar swabs de conjuntiva ocular. Os resultados evidenciam que a qPCR assume a melhor performance frente ao uso dos swabs, em especial, casos subclínicos e de baixa carga parasitária.