Avaliação do efeito da cisplatina e melatonina na expressão de genes reguladores no processo de morte celular em câncer de pulmão

Abstract

A cisplatina é um agente quimioterápico altamente eficaz no tratamento do câncer de pulmão. No entanto, seus efeitos colaterais graves permanecem como uma limitação para sua ampla utilização, em particular, a ototoxicidade e genotoxicidade. A melatonina vem se destacando pela capacidade antioxidante de reduzir esses efeitos adversos induzidos pela cisplatina, e por aumentar a eficácia da quimioterapia devido a mecanismos citotóxicos que levam a apoptose das células neoplásicas. Porém, os possíveis alvos envolvidos nesse processo ainda são desconhecidos. Diante disso, o objetivo do presente estudo é investigar o efeito da cisplatina associada à melatonina na modulação dos principais genes envolvidos no processo de morte celular em câncer de pulmão. Para isso, foi realizado o cultivo das linhagens de adenocarcinoma pulmonar H1299 e A549, onde foram submetidas ao tratamento com cisplatina e melatonina isoladas e em associação por um período de 6 horas. A extração de RNA total da cultura de células foi feita pelo Trizol® (Invitrogen, UK). O DNA complementar (cDNA) foi utilizado para avaliar a expressão dos genes: TP53, BAX, BID, BCL-2 e Caspases 3 e 7 por reação da polimerase da transcrição reversa em tempo real (RT-PCR) pelo método TaqMan. A análise dos dados foi realizada pelo GraphPad Prism 5 e os valores de p<0,05 foram considerados significativos. Os resultados mostraram que o tratamento com cisplatina foi capaz de modular a expressão dos genes BAX, BID, CASP3 e CASP7 e o supressor tumoral TP53, na linhagem H1299. Em paralelo, foi possível observar um efeito sinérgico no tratamento concomitante à melatonina na expressão dos genes BID e CASP3, na mesma linhagem. A linhagem A549 foi mais susceptível à associação da cisplatina e melatonina, sendo possível observar, com a expressão dos genes envolvidos na via intrínseca da apoptose. Contudo, o tratamento com a melatonina isolada aumentou apenas a expressão de CASP7 em ambas as linhagens tumorais. Em contrapartida, nenhuma modulação foi observada no gene TP53 quando tratada com a melatonina isolada ou associada ao quimioterápico cisplatina. Com os resultados obtidos, foi concluído que a associação da cisplatina e melatonina pode potencializar o efeito de morte celular no adenocarcinoma pulmonar, modulando as vias de apoptose e supressão tumoral. Portanto, o uso da melatonina associada a este fármaco potencializa a expressão de moléculas presentes na via da apoptose e consequentemente, em ensaio clínicos futuros, poderá ser utilizada como coadjuvante na tentativa de reduzir os efeitos tóxicos dos fármacos derivados de platina, permitindo um melhor prognóstico e qualidade de vida aos pacientes.