Atividade anti-Candida e inibição de biofilmes por extratos de Licania rigida Benth. e Persea americana Mill

Abstract

A elevada incidência de infecções por leveduras do gênero Candida associada ao uso indiscriminado dos agentes antifúngicos, tem causado preocupação devido a seleção de cepas resistentes, principalmente aos antifúngicos da classe dos azólicos. Desta forma, a busca por substâncias naturais, como extratos de plantas, com propriedades antifúngicas tem aumentado consideravelmente. Diante disso, este trabalho objetivou caracterizar a composição química e avaliar o potencial antifúngico do Extrato Etanólico das folhas de Persea americana e Licania rigida, verificando a ação destes na micromorfologia de Candida, bem como o potencial inibitório destes sobre células planctônicas e biofilmes de Candida. Na identificação dos constituintes químicos dos extratos foi utilizado o UPLC-QTOF-MS/MS. A atividade antifúngica in vitro foi determinanda pela Concentraçao Inibitoria Mínima (CIM) de acordo com os documentos M27-A3 e M27-S4 do Clinical and Laboratory Standards Institute, e verificada a Concentração Fungicida Minima (CFM), utilizando os isolados: Candida krusei URM6352, C. krusei URM4263, C. krusei URM5840, C. albicans URM5900, C. krusei URM5712, C. albicans ATCC90028, C. tropicalis URM5732, C. tropicalis INCQS40042 e C. albicans INCQS40006. Foi analisado o efeito modulador dos extratos associados ao Fluconazol. As alterações morfológicas e a mensuração dos filamentos das cepas foram observadas através da técnica de microcultivo em câmara úmida. A formação dos biofilmes foi induzida em discos de resina acrílica, e a quantificação foi realizada através da redução de sal tetrazólico (MTT). Para o tratamento dos mesmos, foram utilizados extratos Etanólico das Folhas de P. americana e L. rigida e fluconazol. Neste estudo, foram identificados dez constituintes químicos presentes no extrato de P. americana e seis no extrato de L. rigida. Nos testes de suscetibilidade in vitro, a menor CIM observada para o extrato de Persea foi de 64μg/mL em Candida krusei URM5840, para o fluconazol, as CIM variaram de 64 a 1μg/mL, e frente ao extrato de Licania, a CIM foi 32 μg/mL. A CFM do Extrato de Licania para o isolado C. albicans URM5900 foi de 512 μg/mL, para C. krusei URM5712 igual a 128 μg/mL, C. krusei URM4263, C. krusei URM5840 e C. krusei URM6352 CFM de 32 μg/mL e para o extrato de Persea com os isolados C. krusei URM6352 e C. krusei URM5840 foi igual a 32 μg/mL; frente a C. krusei URM6352 foi determinado CFM igual a 64 μg/mL. O extrato de Licania apresentou atividade sinérgica com fluconazol frente a cepa Candida krusei URM5712. Os extratos das duas espécies vegetais revelaram-se efetivos na diminuição do processo de filamentação de algumas das cepas analisadas. Quanto a indução do biofilme, todos os isolados foram capazes de formar biofilme in vitro em 48 horas. O extrato de L. rigida demonstrou resultados significativos no tratamento do biofilme de algumas cepas analisadas. Portanto, os extratos testados revelaram atividade antifúngica in vitro contra as células planctônicas das espécies de Candida. O extrato de Licania expressou resultados mais significativos no processo de modulação, diferentemente do observado com o extrato de Persea. Ambos foram efetivos na diminuição do processo de filamentação de cepas utilizadas neste estudo. Portanto, a descoberta do potencial antifúngico destas espécies vegetais permite torná-las ferramentas promissoras como alternativa terapêutica para o tramento de pacientes com infecções causada por espécies de Candida.