Avaliação do perfil fenotípico de células mononucleares do sangue periférico de pacientes com Leishmaniose Tegumentar Americana na presença de epítopos vacinais derivados do proteoma de Leishmania (Viannia) braziliensis

Abstract

As leishmanioses são um conjunto de doenças cujo agente etiológico é um protozoário do gênero Leishmania. São amplamente distribuidas nas zonas tropicais do globo, totalizando cerca de 102 países. As manifestações clínicas são divididas em: visceral (LV) e tegumentar (LT), com a LT responsável pela maioria dos casos em todo mundo. No Brasil, é a Leishmania (Viannia) braziliensis a principal espécie responsável pela LT. O tratamento da doença possui diversos fatores limitantes e a vacinação é uma promissora alternativa para o combate à doença. Um dos grandes fatores que limitam o desenvolvimento de vacinas é a escassez de antígenos capazes de ativar células e moléculas que estejam relacionados com a proteção da doença. Além disso, grande parte dos estudos se concentra em investigar modelos animais, que nem sempre refletem o que acontece em seres humanos. Neste contexto, o objetivo desse trabalho foi Avaliação do perfil fenotípico de células mononucleares do sangue periférico de pacientes com Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) na presença de epítopos vacinais derivados do proteoma de L. (V.) braziliensis. Para isso, as PBMCs de 7 pacientes e 7 controles foram isoladas e estimuladas com um “pool” dos epítopos peptídicos e, por fim, marcadas com os principais marcadores fenotípicos de células T de memória (Tm) (CD45RA⁻), T Citotóxicas (T CD8⁺) e T auxiliares (T CD4⁺) e analisadas por citometria de fluxo. Os sobrenadantes foram coletados para dosagem das citocinas IL-2, IL-4, IL-10 e IFN-γ. A análise estatística foi realizada empregando-se testes não paramétricos. Foi observado um perfil de subpopulações de células CD8⁺ com maior expressão de marcadores T-bet e RORɣT em pacientes com LTA, quando comparado aos indivíduos saudáveis. A expressão significativa dos marcadores T-bet e RORɣT também foi observada na população CD4⁺ em pacientes quando comparado a indivíduos saudáveis. Com relação ao perfil de células T de memória, foi observado que na população T CD8⁺ o perfil tende ao de células T de memória central (TCM), enquanto na população T CD4⁺ a tendência direciona para o perfil de T de memória efetora (TEM). Esses últimos resultados demonstram que células T CD4⁺ e T CD8⁺ desempenham diferentes papéis no momento de uma resposta imunológica voltada à memória, de modo que a população T CD4⁺ parece estar voltada a uma resposta mais efetora enquanto que a T CD8⁺ parece ter maior contribuição em uma resposta de memória em longo prazo. Além disso, a expressão de marcadores T-bet e RORɣT pelas células T CD8⁺, ainda não visto na LTA, sinaliza a necessidade de aprofundamento no estudo do papel dessas subpopulações no desenvolvimento dessa doença. Não foi observada diferença significativa entre amostras sem estímulo para as estimuladas com o “pool” de peptídeos para nenhuma população estudada. Quanto aos resultados de produção de citocinas investigadas, não foi observada produção significativa. Sendo assim, os resultados indicam que, em pacientes com LTA, os perfis TCM e TEM se apresentam em proporções diferentes em linfócitos T CD4⁺ e T CD8⁺. Esses perfis são importantes na investigação de um candidato vacinal para LTA. Esses dados fornecem uma importante contribuição para o conhecimento e combate contra a LTA.