Avaliação da expressão e localização subcelular de proteínas GP63 parálogas em espécies de Leishmania

Abstract

Parasitas flagelados do gênero Leishmania, agentes etiológicos da leishmaniose, apresentam como importante fator de virulência a protease GP63, codificada por um número grande de genes parálogos localizados em cromossomos distintos (10, 28 e 31). O significado funcional destes múltiplos parálogos permanece desconhecido, porém estudos prévios implicaram os genes localizados no cromossomo 10 na patogênese no hospedeiro mamífero. Estes genes foram classificados em grupos diferentes baseados na extremidade C-terminal dos respectivos polipeptídios. Este estudo buscou avaliar representantes desses grupos quanto a sua expressão e localização subcelular em L. braziliensis e L. infantum, buscando identificar diferenças funcionais. Para isso foram utilizados soros produzidos contra peptídeos encontrados em GP63 de L. braziliensis, sendo dois encontrados em parálogos específicos e um terceiro conservado em todos aqueles com genes localizados no cromossomo 10. Testes com proteínas recombinantes primeiro nos permitiram confirmar especificidades distintas em relação aos parálogos de GP63 para os anticorpos gerados. Estes foram então utilizados para se avaliar a expressão da proteína ao longo de curvas de crescimento de formas de vida de ambas as espécies. Com isso observou-se a expressão muitas vezes simultânea, porém com perfis distintos, de diferentes parálogos. Perfis distintos de localização subcelular também foram identificados com os diferentes anticorpos em frações proteicas dos parasitas produzidas com digitonina. Por fim, ensaios de imunofluorescência confirmaram a localização em membrana de ao menos um grupo de parálogos. Estes estudos evidenciam diferenças claras entres parálogos distintos que, entretanto, ainda necessitam ser melhor caracterizadas.