Produção de antígenos recombinantes para os genes E5 e L1 do Papilomavirus humano tipo 16 em Leishmania tarentolae

Abstract

A infecção por HPV é considerada um problema de saúde pública sendo a doença sexualmente transmissível mais comum na população. O desenvolvimento do câncer no colo do útero está intimamente associado à presença da infecção por HPV em 95% dos casos, sendo alguns tipos virais classificados de alto risco oncogênico, como o HPV 16. Alguns genes do HPV apresentam um papel muito importante para o estabelecimento da infecção, como os genes L1, L2 e E5. As vacinas disponíveis atualmente (profiláticas) são obtidas a partir da expressão da proteína L1 de tipos oncogênicos do HPV em sistemas heterológos. A proteína L2, apesar de ser encontrada em menor quantidade, desempenha um papel importante na infecção pelo HPV. Alguns estudos têm sido realizados para expressão da proteína E5 com a finalidade de desenvolvimento de uma vacina terapêutica, entretanto não existe ainda uma vacina deste tipo disponível comercialmente. Neste trabalho, foi proposto utilizar o sistema heterólogo da Leishmania tarentolae para expressar as proteínas L1, L2 e E5 de HPV 16. Esse protozoário é de fácil manipulação, utilizando meio simples, com produção de proteínas em maior quantidade em um tempo mais curto (em relação a outros sistemas eucarióticos), e pode ser cultivada em laboratório NB1, possibilitando reduzir custos de produção de vacinas anti-HPV. O vetor de expressão utilizado foi pLEXSY-Hyg2 que permite a expressão de proteínas recombinantes por recombinação homóloga no sistema proposto. A expressão das proteínas foi avaliada em amostras de sobrenadante da cultura e pellets lisados de células de L. tarentolae por SDS-PAGE e Western Blotting. Contudo, alguns genes não se encontravam na matriz de leitura correta impossibilitando a visualização da expressão e para outro gene foi possível a visualização transitória de uma proteína com tamanho adequado, porém sem a visualização do controle positivo. Tais resultados sugerem análises complementares para contornar os problemas evidenciados durante o estudo.