Avaliação do glicofenótipo de tecidos de câncer de mama utilizando pontos quânticos conjugados à lectina Cramoll

Abstract

Avaliar o padrão de glicosilação do câncer pode fornecer informações valiosas relacionadas a iniciação, desenvolvimento e progressão tumoral, pois durante a carcinogênese ocorrem alterações no perfil glicídico acarretando mudanças nos processos biológicos como: adesão, reconhecimento imunológico e diferenciação celular. Devido a isso, existe uma demanda por metodologias de alta sensibilidade capazes de detectar e avaliar essas modificações com alta especificidade. Nesse contexto, lectinas conjugadas a pontos quânticos (PQs) têm se destacando como interessantes ferramentas para estudo da glicobiologia associada a processos biológicos, assim como os neoplásicos. Isso se deve às singulares propriedades dos PQs, como sua alta fotoestabilidade e sua superfície ativa para conjugação a biomoléculas e a capacidade das lectinas de interagir com os glicídios de maneira específica. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi investigar o glicocódigo de tecidos de mama humano: normal, diagnosticado com fibroadenoma (FB) e carcinoma ductal invasivo (CDI) utilizando a lectina Cramoll conjugada aos PQs. Para isso, purificamos a lectina Cramoll 1,4, que reconhece resíduos de glicose e manose e a conjugamos por adsorção a PQs de Telureto de Cádmio (CdTe). O conjugado foi analisado através da espectroscopia de absorção e emissão, determinação da atividade hemaglutinante, dicroísmo circular e pela marcação em células de Candida albicans e os resultados indicaram que um conjugado com intensa fluorescência, especificidade e funcionalmente ativo foi obtido. As imagens de fluorescência mostraram que as células ductais foram preferencialmente marcadas no tecido mamário normal e no FB, enquanto no CDI tanto as células quanto o estroma foram intensamente marcados pelo conjugado. Além disso, foi proposto um método para avaliar quantitativamente a intensidade da marcação tecidual por meio de um ensaio fluorescente de microplaca (EFM), o qual demostrou de maneira prática e sensível ser capaz de mensurar a quantidade de biomarcadores, como a glicose e manose, expostos nos tecidos. O EFM também indicou que a quantidade desses carboidratos aumentou de acordo com o grau de malignidade da amostra, corroborando com a análise microscópica. Portanto, o conjugado PQ-Cramoll mostrou-se ser uma ferramenta promissora para estudar e avaliar os perfis de glicídios em tecidos normais e transformados, sendo possível estabelecer comparações entre eles, através de localização morfológica por microscopia de fluorescência e quantificação por meio do EFM.