Desenvolvimento de estratégia vacinal contra o Zika Vírus utilizando a levedura Pichia Pastoris como carreadora de antígenos

Abstract

Leveduras, como Pichia pastoris, vêm sendo exploradas não apenas para produção de proteínas recombinantes, mas também como carreadoras de antígenos em estratégias vacinais. O desenvolvimento de vacinas para o vírus da Zika é importante para a saúde pública, devido às manifestações clínicas neurológicas que podem ser desencadeadas pela infecção. O presente trabalho visou a produção de proteínas do ZIKV em P. pastoris e a avaliação imunológica frente às leveduras recombinantes dispondo os antígenos em sua superfície. Os cassetes de expressão foram compostos por epítopos das proteínas Envelope e NS1, preditos in silico quanto a capacidade de ligação a células B, e a MHC classes I e II. Os genes foram fusionados ao gene da proteína âncora α-Aglutinina, clonados em vetor de expressão e utilizados para transformar P. pastoris. Western blot e imunofluorescência foram empregados para confirmar a produção e a ancoragem das proteínas recombinantes. A resposta imune promovida pelas leveduras foi avaliada, in vitro e in vivo (em modelo murino). A dosagem de citocinas indicou um perfil de respota tipo Th1, similar ao induzido pelo vírus. P. pastoris expressando os epítopos EnvNS1 se destacou frente as outras construções compostas pelos conjuntos de epítopos de cada proteína, individualmente. EnvNS1 apresenta uma seleção de epítopos arranjados de forma inédita, e se mostra um candidato vacinal promissor diante do seu potencial imunogênico, em relação a ativação de linfócitos T CD4+ e CD8+, e às citocinas induzidas.