Avaliação imunológica de peptídeos de Leishmania (Viannia) braziliensis como potenciais candidatos vacinais para a Leishmaniose Tegumentar

Abstract

As Leishmanioses são um grupo de doenças tropicais e negligenciadas causadas por protozoários do gênero Leishmania. Além do controle de vetores, dentre as medidas existentes para controlar sua disseminação, estão inclusos o diagnóstico e o tratamento de pacientes, este que é tóxico e possui eficácia variável. Aliado a isso, o uso de uma vacina teria o maior impacto no controle dessas doenças. Em um trabalho prévio de nosso grupo, métodos de imunoinformática utilizados para pesquisar epítopos de células T CD4⁺ e CD8⁺ conservados entre espécies no proteoma predito de Leishmania (Viannia) braziliensis, permitiram identificar e selecionar dez sequências conforme maior afinidade de ligação aos complexos de MHC. A função desses complexos envolve a codificação de proteínas de superfície que reconhecem e apresentam antígenos para o sistema imune adaptativo, sendo importante avaliar moléculas capazes de se ligarem a eles principalmente em um contexto imunoterapêutico ou vacinal. Esses peptídeos foram previamente testados frente a células de indivíduos com Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) e controles (CT), sendo imunogênicos. Para o presente trabalho, designou-se P1 o pool de 5 dos peptídeos capazes de estimular indistintamente, células de indivíduos saudáveis e de pacientes LTA e P2, o pool que estimulou especificamente células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) de pacientes. Eles foram sintetizados (Abm Inc. Richmond- Canadá) e solubilizados de acordo com as instruções do fabricante para serem testados como potenciais candidatos vacinais. Foram realizados ensaios com PBMCs de CT e de pacientes para proliferação celular, imunofenotipagem e dosagem de citocinas, e em paralelo, um ensaio de imunização e infecção com Leishmania amazonensis em camundongos BALB/c. Através do ensaio de CFSE, foi possível observar que houve uma maior proliferação celular nos grupos estimulados com os pools. O ensaio de imunofenotipagem sinalizou que não houve diferença significativa entre os grupos quanto a células CD4⁺ de memória central. Já na população de células efetoras foi possível observar uma maior prevalência dessas células no grupo LTA em relação ao CT. Quando estimuladas com os 2 pools de peptídeos, houve diferença significativa das células CD8⁺ de memória central no grupo LTA em relação ao CT e embora sem diferença significativa com relação às células CD8⁺ de memória efetora, houve um indicativo dessas células serem encontradas em maior número no grupo LTA. Em paralelo, foram quantificados os fatores de transcrição T-bet e ROR-γT. Houve diferença significativa na produção de T-bet tanto por células CD4 como CD8 pelo grupo LTA após os estímulos com ambos os pools testados. Foram ainda observados níveis significativos de ROR-γT em células CD4 do grupo LTA quando estimuladas com P1 e P2; porém, não houve diferença entre grupos nas células CD8. Com relação aos resultados de imunização em camundongos BALB/c, foi encontrada diferença significativa no percentual de células proliferadas nos grupos imunizados com os peptídeos e a molécula adjuvante antes e depois do desafio com Leishmania amazonensis. Sendo assim, os resultados indicam o potencial imunogênico que os grupos de peptídeos testados apresentam, o que dá suporte ao desenvolvimento de uma possível abordagem vacinal.