Desenvolvimento de bioensaios utilizando Cramoll 1,4 como alternativa para o diagnóstico do câncer de próstata

Abstract

O câncer de próstata destaca-se por sua elevada incidência e mortalidade, e seu diagnóstico ainda representa um desafio na medicina. Alterações nos perfis de glicosilação têm sido identificadas como potenciais marcadores da doença. Lectinas têm sido utilizadas para investigar e detectar essas alterações, integradas a diferentes métodos bioanalíticos e ao uso de nanomateriais. Neste trabalho, foram desenvolvidos bioensaios em microplacas e biossensores baseados em eletrodos sólidos e impressos empregando a lectina Cramoll 1,4, para analisar seu potencial na detecção de alterações nos perfis de glicosilação em soros de pacientes com câncer de próstata. Os ensaios foram padronizados com a glicoproteína fetuína, para a qual a lectina apresenta elevada afinidade. Foi desenvolvido um biossensor eletroquímico utilizando eletrodo sólido de carbono vítreo modificado com o polímero poli-L-lisina, nanotubos de carbono e Cramoll 1,4 para caracterização eletroquímica dos perfis de glicosilação em soros de pacientes com hiperplasia benigna prostática e câncer de próstata. Um estudo eletroquímico também foi efetuado em eletrodo impresso de carbono com nanotubos de carbono, para melhor analisar o fenômeno de interação de Cramoll 1,4 com fetuína. Um ensaio colorimétrico em microplaca utilizando Cramoll 1,4 conjugada à peroxidase e um ensaio fluorescente em microplaca com a lectina conjugada à nanocristais fluorescentes (quantum dots) também foram desenvolvidos. O biossensor de Cramoll 1,4 mostrou sinais de corrente significativamente diferentes para as amostras de hiperplasia e câncer de próstata após incubação com os soros, com um aumento do sinal correlacionado ao grau de agressividade do tumor. A detecção linear de fetuína por Cramoll 1,4 foi possível tanto no eletrodo sólido como no eletrodo impresso, revelando-se uma nova estratégia para avaliar a interação Cramoll 1,4 – fetuína, e futura aplicação na avaliação de perfis de glicosilação em amostras de soros. Os resultados parciais dos ensaios colorimétricos revelaram alterações dos perfis de glicosilação detectáveis em soros de câncer de próstata em relação à hiperplasia, a partir da observação de um aumento na reatividade de Cramoll 1,4 aos soros, correlacionado ao grau de agressividade do tumor. O ensaio colorimétrico tipo “sanduíche” para analisar os padrões de glicosilação do marcador de câncer de próstata, PSA, composto por anticorpo de captura e Cramoll 1,4 foi preliminarmente padronizado. O conjugado fluorescente de Cramoll 1,4 – Quantum dots mostrou-se ativo para marcação de Candida albicans e ligação à manana. Os métodos baseados em Cramoll 1,4 foram úteis na detecção da glicoproteína fetuína e mostraram potencial na detecção de perfis de glicosilação associados ao câncer de próstata, sendo alternativas úteis na investigação de alterações de glicosilação em diferentes fluidos biológicos, e até mesmo em células, relacionadas ao câncer de próstata e a outras doenças.