Caracterização das interações moleculares e mRNAs alvos de proteínas com domínio de ligação ao RNA implicadas no processo de tradução em Leishmania infantum

Abstract

A regulação da expressão gênica em Leishmania tem uma grande dependência do controle da estabilidade e tradução dos seus mRNAs. Em eucariotos, ambos são eventos associados a proteína de ligação a cauda poli-A (PABP) e outras proteínas com domínios de ligação a RNA, as RBPs. Em Leishmania foram descritas três PABPs, sendo que a PABP1 se associa a mRNAs alvos, complexos proteicos e RBPs distintas das PABP2/3. Seu papel funcional, contudo, ainda não está claro. Esse trabalho buscou auxiliar na definição de suas funções a partir da caracterização de RBPs parceiras, as RBP23, DRBD2 e ZC3H41. Extratos citoplasmáticos de Leishmania infantum expressando cada RBP fusionada com o peptídeo HA foram utilizados em ensaios de imunoprecipitação, com seus parceiros e mRNAs alvos identificados por espectrometria de massas e sequenciamento de RNAs. Foi demonstrada a interação preferencial da RBP23 com a PABP1 e o complexo de tradução EIF4G3/EIF4E4, da DRBD2 com as PABP2/PABP3 e da ZC3H41 com as três PABPs. Ensaios de interação proteína-proteína confirmaram uma ligação direta das RBP23 e DRBD2 com as três PABPs, mapeando regiões especificas das PABPs envolvidas nessa ligação. Os mRNAs co-precipitados com a RBP23, e em menor escala a ZC3H41, codificam preferencialmente proteínas ribossomais, semelhante a PABP1 e diferentemente da DRBD2. Estes dados sugerem um novo modelo para o reconhecimento destes mRNAs pelas RBP23 e PABP1 em Leishmania.