Aplicações biotecnológicas do pro-biótico Kefir (Consórcio BIONAT 01) e seus derivados

Abstract

Probióticos são organismos vivos que, quando administrados em quantidades adequadas, conferem benefícios à saúde do hospedeiro. O kefir é um probiótico originário da região do Cáucaso, composto por leveduras e bactérias ácido láticas que produzem um líquido metabólico fermentado e um biopolímero denominado kefirana. Tanto o kefir quanto seus produtos apresentam atividade biológica, tais como ação antibiótica in vitro, atividade antiinflamatória e imunomoduladora in vivo, além de aplicações na indústria alimentícia. O presente estudo investigou os efeitos de extratos obtidos a partir dos grãos de kefir (consórcio BIONAT 01), do seu líquido metabólico fermentado e da kefirana em linhagens de células tumorais (MCF-7, NCI-H292, HEP-2 e HeLa) e cultura primária de astrócitos. O açúcar mascavo, utilizado como substrato para a manutenção das culturas de kefir, foi empregado como controle. Para a preparação dos extratos, tanto os grãos de kefir quanto o açúcar mascavo foram secos e em seguida submetidos à extração fracionada, utilizando-se um gradiente de polaridade (ciclohexano, acetato de etila e metanol-água 8:2). Além destes, também foi produzido um extrato ciclohexânico a partir do meio fermentado da cultura do micro-organismo 29, isolado do BIONAT 01. Os extratos de kefir e seus produtos foram avaliados quanto a sua atividade antioxidante pelo método de DPPH (2,2-difenil-1-picrilhidrazil) e antimicrobiana pelo método de difusão em disco utilizando Staphylococcus aureus (UFPEDA- 01), Micrococcus luteus (UFPEDA-06), Bacillus subtilis (UFPEDA-16), Enterococcus faecalis (UFPEDA-138), Pseudomonas aeruginosa (UFPEDA-39), Escherichia coli (UFPEDA-224) Mycobacterium smegmatis (UFPEDA-71), Serratia marcescens (UFPEDA - 398) e Candida albicans (UFPEDA-1007). Também foram realizados testes para avaliação de antibiose em ensaios de blocos de gelose e estria cruzada utilizando 25 amostras, selecionadas a partir de 49 isolados da cultura BIONAT 01, frente a C. albicans. Os extratos obtidos a partir dos grãos de kefir, a kefirana e o líquido metabólico também foram testados frente às diferentes linhagens celulares, por 24 h, e avaliados quanto à viabilidade celular por protease ativa e por brometo de [3-(4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-difenil tetrazolium] (MTT). Apenas o extrato de açúcar mascavo em acetato de etila, utilizado como controle, apresentou atividade antioxidante pelo DPPH. Na avaliação antimicrobiana, o extrato de kefir de ciclohexano apresentou atividade frente aos seguintes micro-organismos: C. albicans, M. smegmatis e E. faecalis. Posteriormente os testes de antibiose indicaram que a linhagem nº 29 apresentou atividade contra C. albicans. Extratos hexânicos do fermentado da cultura da bactéria nº 29, isolada do BIONAT 01, não apresentaram atividade antimicrobiana. Nas culturas de células HeLa os compostos testados não apresentaram diferenças significativas quando comparados ao controle para o teste de viabilidade celular com o MTT, o mesmo se deu em cultura primária de astrócitos analisadas nos períodos de 24, 48 e 72h. Os resultados obtidos no presente estudo sugerem que o kefir e seus derivados não apresentam diminuição da viabilidade celular frente as linhagens celulares analisadas e apontam os grãos do kefir como uma fonte promissora de atividade biológica, até então pouco explorada, como foi comprovado pela ação do extrato ciclohexânico dos grãos de kefir frente aos microorganismos referidos.