Caracterização de interações entre proteínas constituintes de um complexo de iniciação da tradução do tipo eIF4F em formas sanguíneas de Trypanosoma brucei

Abstract

Os tripanossomatídeos são protozoários patogênicos que se caracterizam pelo controle da sua expressão gênica ser pós-transcricional, o qual inclui eventos regulatórios durante a tradução dos mRNAs. Em geral, a tradução em eucariotos se inicia através do reconhecimento dos mRNAs por meio do complexo heterotrimérico eIF4F (eIF4A, eIF4G e eIF4E). Múltiplos homólogos dessas subunidades foram identificados em tripanossomatídeos, formando diferentes complexos do tipo eIF4F. Um desses é formado pelas proteínas EIF4E6/EIF4G5/EIF4G5-IP, porém sua função ainda não foi definida nem o modo de interação entre suas subunidades. Este trabalho buscou contribuir na caracterização destas três proteínas em células sanguíneas de Trypanosoma brucei, e mapear in vitro a interação entre as mesmas. Inicialmente verificou-se por western blot a expressão da EIF4G5 em ambas as fases do ciclo de vida do parasita. Linhagens de T. brucei expressando as proteínas EIF4G5 e EIF4G5- IP fusionadas ao tag PTP foram então obtidas e usadas em ensaios de coimunoprecipitação, técnica pela qual se pode confirmar a formação do complexo na fase sanguínea do parasita. Por fim, proteínas recombinantes foram avaliadas quanto a sua capacidade de interagir entre si em ensaios do tipo pull-down. Foram verificadas interações diretas do EIF4E6 tanto com EIF4G5 quanto EIF4G5-IP. Mutações nos aminoácidos EF91-92AA no EIF4G5 aboliu sua ligação ao EIF4E6, sugerindo ser este o sítio de interação entre essas proteínas. Esses resultados avançam no delineamento da estrutura e função do referido complexo nos tripanossomatídeos.