Avaliação de atividade ovocida de lectinas ligadoras de quitina contra Aedes aegypti

Abstract

As lectinas, proteínas de ligação a carboidratos, isoladas a partir de sementes de Moringa oleifera (WSMoL), bem como da entrecasca (MuBL), cerne (MuHL) e folha (MuLL) de Myracrodruon urundeuva são agentes larvicidas contra Aedes aegypti. WSMoL também foi relatada como agente ovicida contra este mosquito e a sua concentração necessária para reduzir a taxa de eclosão em 50% (EC50) é de 0,1 mg/mL. Este trabalho teve como objetivo avaliar a atividade ovicida de MuBL, MuHL e MuLL, bem como avaliar os locais de ligação de WSMoL e MuBL nos ovos de A. aegypti. As lectinas foram isoladas seguindo protocolos previamente estabelecidos que incluíram extração das proteínas da farinha (10 g) do tecido vegetal com 100 mL de água destilada (WSMoL) ou NaCl 0,15 M (MuHL, MuBL, MuLL), precipitação de proteínas com sulfato de amônio (0-60%, WSMoL; 20-40%, MuBL; 40-60%, MuHL; 60-80%, MuLL) e cromatografias em colunas de quitina equilibradas (0,6 mL/min) com NaCl 0,15 M e eluidas com ácido Acético 1,0 M. As lectinas isoladas foram dialisadas (6h em água destilada) para a eliminação do eluente. Os ovos em papel de filtro foram selecionados considerando a sua integridade utilizando um estereomicroscópio. Cada ensaio ovicida correspondeu a 20 mL de solução de lectina onde foram imersos 50 ovos. O número de larvas eclodidas foi determinado após 72 h de incubação a 25-27 °C e a EC50 foi determinada pela análise de probit. Os conjugados WSMoL-FITC e MuBL-FITC (na EC50) foram utilizados para avaliar os locais de ligação das lectinas utilizando um microscópio de fluorescência. Os controles contendo apenas os ovos ou ovos incubados apenas com o FITC também foram realizados. MuBL, MuHL e MuLL foram agentes ovicidas e os valores de EC50 foram 0,26, 0,80 e 0,88 mg/mL, respectivamente. Com base nos melhores valores da EC50, WSMoL e MuBL foram selecionados para análise de microscopia de fluorescência. Em comparação com os controles, as imagens revelaram a presença de WSMoL-FITC na cabeça, proventriculo e intestino de embriões. A marcação MuBL-FITC foi observada na cabeça e no trato digestivo. Em conclusão, as lectinas de M. urundeuva também são agentes ovicidas contra A. aegypti e a atividade ovicida de WSMoL e MuBL está ligada à penetração dessas proteínas no ovo e interação com o trato digestivo do embrião em desenvolvimento.