Construção de vetores de expressão não comercial contendo os genes L1 e quimeras de L1-E5 do Papilomavírus bovino tipo 1

Abstract

O papilomavírus bovino (BPV) é um vírus altamente disseminado no mundo capaz de infectar rebanhos bovinos e provocar a papilomatose bovina, infecção que debilita a saúde do animal e pode resultar em morte. O Brasil possui o maior rebanho comercial do mundo, tendo grande destaque na exportação de carne bovina e na produção de leite, contudo a falta de dados precisos sobre a doença ainda são escassos o que dificulta o desenvolvimento de medidas de controle da infecção. Além disso, não existe uma vacina ou tratamento efetivo para papilomatose bovina. Deste modo, o presente trabalho teve como objetivo a produção de cassetes para expressão de diferentes antígenos de BPV1 em linhagens recombinantes de Leishmania tarentolae baseadas em um vetor de expressão não comercial. As quimeras foram construídas mediante PCR de fusão a partir do gene L1 selvagem clonado previamente no vetor de expressão pPGKΔ3. Através de eletroforese em gel de agarose foi observado a construção de fragmentos com tamanho aproximado de 1500 pb, indicando que houve a fusão dos dois fragmentos produzindo uma quimera no tamanho esperado. As construções foram clonadas no vetor pGEM-T Easy e a correta construção dos insertos foi confirmada por digestão e análise de sequenciamento de DNA. Posteriormente, as quimeras foram subclonadas no vetor de expressão pSPααNEO, sendo a clonagem novamente confirmada mediante digestão enzimática. Os resultados demonstram que os cassetes de expressão foram corretamente construídos e podem ser utilizados em estudos futuros de avaliação da expressão proteica das quimeras no sistema de Leishmania tarentolae.