Correlação entre sítios de DNAr 45S e regiões organizadoras nucleolares em espécies do gênero Nothoscordum Kunth (Amaryllidaceae)

Abstract

Os genes ribossomais são os genes mais estudados e melhor conhecidos nos eucariotas e sua exata localização nos cromossomos é conhecida em milhares de espécies. Os genes ribossomais 18S-5,8S-25S se localizam em um ou vários locos no genoma, chamados de sítios de DNAr 45S. A transcrição destes genes forma nos cromossomos metafásicos, regiões menos condensadas conhecidas como constrições secundárias ou regiões organizadoras de nucléolos (RONs). Em geral, ocorre apenas um par de sítios por cariótipo, mas em alguns genomas são detectados vários locos de DNAr 45S, sendo que nem sempre todos são ativos transcricionalmente, sugerindo que alguns sítios podem ser inativos temporária ou permanentemente. A expressão desses sítios pode ser avaliada pela coloração com nitrato de prata, que cora as proteínas nucleolares detectando os nucléolos e as RONs que apresentaram atividade transcricional na intérfase anterior. Contudo, a sensibilidade dessa técnica tem sido questionada principalmente porque alguns sítios nunca aparecem corados. Além disso, não se sabe se todos os sítios são funcionais ou se o tamanho ou a posição deles no cromossomo influencia na sua ativação. O gênero Nothoscordum apresenta espécies com cromossomos grandes, pouco numerosos e com alta variabilidade em número e posição dos sítios de DNAr, sendo um material ideal para avaliar a expressão dos sítios múltiplos. Sete espécies (10 citótipos diferentes), cujos sítios de DNAr já têm distribuição conhecida, foram analisadas utilizando duas técnicas diferentes de coloração com nitrato de prata, sendo uma delas mais eficiente na marcação das RONs enquanto a outra mais eficiente na coloração dos nucléolos em interfase. Os resultados sugerem que a ativação dos locos de DNAr não é ao acaso, mas é influenciada por sua distribuição no cromossomo. Assim, nas espécies com mais de um sítio de DNAr em um único cromossomo, raramente foi encontrada mais de uma RON. Em duas espécies que apresentaram sítios em cromossomos acrocêntricos e metacêntricos, observou-se que sítios nos acrocêntricos eram preferencialmente expressos. Em conjunto, esses dados indicam que apesar da variação no número de sítios de DNAr em Nothoscordum, os números modais de nucléolos e RONs se alteram muito pouco, levando à ativação preferencial de determinados sítios. Essa preferência provavelmente se deve a um conjunto de fatores, como número de cópias em cada sítio, posição no cromossomo e o ambiente genético de cada espécie.