Detecção de NTPase de Toxoplasma gondii através de anticorpo monoclonal purificado por sistema de duas fases aquosas PEG / Fosfato.

Abstract

A toxoplasmose é uma zoonose de larga distribuição mundial, causada pelo Toxoplasma gondii, protozoário intracelular obrigatório. Uma vez o indivíduo infectado, o parasito se mantém latente por vários anos, pois o rápido avanço da imunidade humoral e celular restringe eficientemente a ação patogênica do parasito. Entretanto, a imaturidade do sistema imune (como em fetos e recém-nascidos) ou a sua deficiência (no caso dos indivíduos imunodeprimidos) pode causar séria morbidade ou mortalidade. A parasitose apresenta uma variedade de sinais e sintomas clínicos, e o diagnóstico laboratorial torna-se uma ferramenta de importância fundamental. O emprego de uma metodologia diagnóstica que consiga discernir entre infecção latente e ativa é o principal meio para diminuir os danos provocados pelo parasita. O presente trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de uma estratégia diagnóstica na tentativa de elucidar a fase da doença. Para alcançar esse objetivo foi desenvolvido um ensaio sorológico enzimático (enzyme-linked immunosorbent assay – ELISA) utilizando anticorpo monoclonal da classe IgA (mab-IgA - monoclonal antibodies IgA) contra a enzima Nucleosil Trifosfato Hidrolase (NTPase), produzida por taquizoítos de Toxoplasma gondii (forma ativa do parasito). Para desenvolvimento do método, o mab-IgA foi produzido por expansão celular e purificado por meio de sistema de duas fases aquosa: polietileno glicol e fosfato (SDFA: PEG-Fosfato). O anticorpo purificado foi fixado em placas de ELISA e testado frente a soros de indivíduos na fase ativa da infecção, apresentando a forma ocular da doença, diagnosticados clinicamente por meio de fundoscopia. Os resultados revelaram uma concordância entre o teste desenvolvido e o diagnóstico clínico, apresentando especificidade de 86,30% e sensibilidade de 85,18%, com eficiência de 0,89 revelando a capacidade do método em identificar infecção ativa. Diante dos resultados, o presente estudo sugere a possibilidade da utilização de anticorpo monoclonal anti-NTPase de Toxoplasma gondii como marcador de fase ativa.