Análise de polimorfismos não sinônimos do receptor Toll-Like 9 (TLR9) em amostras cervicais infectadas pelo Papilomavírus humano

Abstract

O câncer do colo do útero é um dos principais tipos de câncer no mundo, e seu desenvolvimento está associado principalmente à infecção pelo Papilomavirus humano (HPV). Embora esse tipo de infecção esteja intimamente associado à atividade sexual, a alta incidência das lesões cervicais pode estar relacionada a uma deficiência na resposta imune. Receptores Toll-like (TLRs) tem um importante papel na imunidade inata, atuando no reconhecimento de antígenos e gerando sinais para produção das citocinas pró-inflamatórias. O TLR9, atua no reconhecimento do DNA bacteriano e viral conduzindo ao recrutamento de células imunológicas para os sítios da infecção. Polimorfismos de nucleotídeo único (SNP) em TLR9 podem influenciar no aumento da susceptibilidade a diversas doenças, como, por exemplo, o câncer cervical. O presente estudo teve por objetivo identificar polimorfismos não sinônimos com potencial correlação com a infecção por HPV, assim como avaliar efeitos estruturais e funcionais ocasionados por essas mutações em TLR9 através de ferramentas in silico. Análises para 5 nsSNPs da TLR9 foram realizadas por PCR-RFLP em amostras cervicais de 57 pacientes atendidas nas Unidades de Saúde da Família (SUS, Olinda – PE). Adicionalmente, para determinar como SNPs não sinônimos (nsSNPs) podem afetar a estrutura molecular e a função de TLR9, uma análise de nsSNPs existentes para TLR9 foi realizada e apenas nsSNPs que possuíam variação no grau de hidrofobicidade maior ou igual a 50% foram utilizados para análise preditiva do efeito estrutural e funcional através de 16 algoritmos. A metodologia para PCR-RFLP para os polimorfismos 7021T>G (Met85Arg), 7191G>A (Glu115Gln), 7351C>T (Ala168Val), 7986G>T (Asp380Tyr), 8159G>T (Met347Ile) foi desenhada através de bioinformática. A análise molecular demonstrou que para TR9 8159G>T, o alelo T pode estar associado com lesões cervicais (p=0.0005). Em relação à predição computacional, 18 nsSNPs foram encontrados com alto impacto funcional/estrutural para a TLR9, sendo 12 nsSNPs localizados na região de reconhecimento do patógeno. Através do nosso estudo, descobrimos polimorfismos que podem ter alta correlação com doenças causadas por agentes patogênicos, de acordo com a previsão dos impactos estruturais e funcionais através de polimorfismo deletério não sinônimo na molécula de TLR9.