Detecção e caracterização parcial de queratinases obtidas de dermatófitos estocados na coleção de culturas Micoteca URM

Abstract

Queratinases são enzimas que catalisam hidrólise de proteínas, possuindo grande especificidade por queratina. Essas enzimas são produzidas por um grande número de microrganismos, dentre eles, os fungos dermatófitos são os de maior importância. O potencial de aplicação biotecnológica das queratinases é amplo, podendo estas atuarem na medicina e em diversos setores industriais, como também em processos de biorremediação. Este trabalho teve como objetivo estudar amostras de dermatófitos quanto à produção de queratinase e dentre elas, eleger a melhor produtora para caracterização parcial desta enzima. A determinação qualitativa da atividade queratinolítica foi avaliada em meio sólido contendo como única fonte de carbono e nitrogênio a queratina, onde as amostras Microsporum canis 4962 e Trichophyton mentagrophytes 4156 demonstraram maior atividade queratinolítica dentro de cada gênero. Para determinação quantitativa da atividade queratinolítica, foi realizado a produção da enzima em cultivo submerso, onde o meio liquido contendo sais e queratina de penas foi utilizado. O cultivo foi realizado durante 25 dias, a 28 C em agitador orbital (120rpm), onde avaliou-se a concentração protéica, atividade proteásica, variação do pH e peso seco. O extrato bruto da amostra melhor produtora (Microsporum canis 4962) foi utilizado para caracterização parcial da enzima. A queratinase da amostra Microsporum canis 4962 apresentou uma temperatura ótima a 80ºC e uma termoestabilidade a altas temperaturas (70-90ºC) retendo cerca de 42% de sua atividade nesta faixa de temperatura. A maior atividade foi obtida no pH 9,0 apresentando cerca de 60 % de atividade na faixa alcalina de pH. Os dados obtidos do efeito dos inibidores de proteases mostraram que a queratinase em estudo trata-se de uma serino protease