Imobilização covalente de Concanavalina A em goma de sementes de Parkia pendula magnetizada e sua aplicação biotecnológica

Abstract

A imobilização de proteínas em suportes insolúveis em água constitui-se em importante ferramenta biotecnológica. Por outro lado, a magnetização suporte sintetizado aumenta seu potencial de uso pela facilidade de sua remoção do meio de reação, mediante o uso de um campo magnético, permitindo a remoção de contaminantes e sua reutilização. Dentre as classes de proteínas imobilizáveis destacam-se as lectinas, como a Concanavalina A (Con A), com afinidade a resíduos de glucose, manose e derivados. Gomas provenientes de vegetais constituem uma ótima fonte de polissacarídeos. Sementes de Parkia pendula são capazes de produzir goma (PpeG). Deste modo, o presente trabalho teve como objetivo magnetizar a PpeG, propor como matriz para a imobilização de lectinas e purificar glicoconjugados. Sementes de P. pendula foram hidratadas e o sobrenadante foi submetido à filtração, precipitação, lavagem com etanol e secagem. A goma resultante foi magnetizada pelo método de co-precipitação em solução de cloretos férrico e ferroso, submetida a ativação com NaIO4, e finalmente, incubada com a ConA. A purificação da glicoproteína fetuína foi utilizada como modelo para investigar o uso do derivado magPpeG-ConA como matriz de afinidade. Após a cromatografia e eluição realizada com glucose (300mM), a presença de fetuína foi investigada através de SDS-PAGE. Cerca de 63% de Con A ofertada foi imobilizada no suporte. 14% da amostra de fetuína foi recuperada por eluição competitiva. Depreende-se desses resultados que a goma de P. pendula mostrou ser um polissacarídeo com potencial para utilização como suporte para imobilização de proteínas e sua aplicação como suporte em cromatografia de afinidade