Análise da regulação transcricional de genes de Yersinia em Escherichia coli

Abstract

Bactérias do gênero Yersinia possuem um sistema de secreção tipo III, responsável pela translocação de fatores protéicos conhecidos como Yops, para o interior de células eucarióticas do hospedeiro. A proteína YopH é uma tirosina fosfatase que atua desfosforilando moléculas sinalizadoras e impedindo a fagocitose em macrófagos. Para uma secreção eficiente, ela necessita da presença da chaperona SycH que permite o seu reconhecimento pela maquinaria de secreção. Com a finalidade de analisar a expressão da proteína YopH em E. coli, foi construído um promotor híbrido formado pelo promotor lac de Escherichia coli seguido do promotor yopH de Yersinia enterocolitica. Este promotor foi capaz de direcionar uma forte expressão da YopH, em E. coli, e uma síntese ótima de YopH foi observada com o aumento da temperatura (37oC) e em culturas em fase de crescimento. A expressão da YopH foi investigada em linhagens defectivas de E. coli para as proteínas homólogas às histonas, Hha e H-NS. A expressão foi significantemente maior a 24oC que a 37oC, na ausência de H-NS, mas não na ausência de Hha. Estes resultados são compatíveis com o papel da H-NS na regulação da atividade do promotor yoph, possivelmente através da presença de curvas em sua estrutura. Para determinar se a presença da chaperona SycH influenciaria na expressão da YopH, em E. coli, a sequência codificadora para esta proteína foi amplificada e clonada no plasmídio pBAD33. Foi observada a expressão da SycH em culturas de E. coli, apenas na presença de arabinose. A co-expressão das proteínas YopH e SycH, em EPEC, revelou uma redução na expressão da YopH, na presença de arabinose. O mesmo foi observado em culturas de EPEC contendo apenas o plasmídio pTZ/YopH, onde concentrações variadas de arabinose e glicose estariam influenciando a expressão da YopH. Para verificar o potencial da proteína YopH no diagnóstico da peste, diversos soros de pacientes suspeitos de peste e coelhos imunizados com Y. pestis foram testados por Western-blot. Não houve reconhecimento da YopH nos soros testados