Levana ferromagnetizada: uma matriz de afinidade para purificar lectina de sementes de Cratylia mollis (Cramoll 1)

Abstract

Levanas, compostas por resíduos D-frutofuranosil unidos por ligações β-2,6 podem ser produzidas por diversas espécies de plantas e bactérias. Aplicações para estes polissacarídeos têm sido sugeridas na indústria alimentícia, farmacêutica e na medicina. As partículas magnéticas são largamente estudadas para suas aplicações nas áreas biológica e biomédica. As lectinas são proteínas amplamente distribuídas entre plantas, animais e microorganismos. Cramoll 1 é uma lectina glicose/manose e sua purificação é feita através de um extrato das sementes de Cratylia mollis a 10 % (p/v), posteriormente uma precipitação com sulfato de amônio a 40 a 60 % de saturação (F40-60). Esta foi então cromatografada em Sephadex G-75 (Cramoll 1,4), seguida por uma cromatografia de troca iônica em CM-cellulose (Cramoll 1 e Cramoll 4). Esta lectina tem uma grande variedade de aplicações biotecnológicas. Cramoll 3, lectina galactose específica, também purificada a partir do extrato das sementes de C. mollis e fracionamento com sulfato de amônio a 0 a 40 % de saturação (F0-40), foi cromatografada por exclusão molecular em Sephadex G-100. A Ressonância Magnética Nuclear já é referência mundial para a análise de estruturas moleculares em diversas áreas do conhecimento, sendo utililizada frequentemente para polissacarídeos. O objetivo deste trabalho foi avaliar o uso de levana de Zymomonas mobilis insolubilizada na sua forma magnetizada (FMZAG-12) para purificar lectinas fructose específicas usando preparações de lectinas de sementes de C. mollis. Testes de inibição da Atividade Hemaglutinante (AH) foram utilizados para avaliar a ligação específica de Cramoll 1, Cramoll 1,4, Cramoll 3 e Con A às levanas (ZAG-12, na sua forma nativa e fracionadas por etanol, Z-1-81, ZAP e CP-50). Estas mesmas lectinas e a F40-60 foram incubadas com a FMZAG-12 que foi usada como um suporte de afinidade; as proteínas adsorvidas foram eluídas com seus carboidratos específicos. Métodos eletroforéticos e AH foram utilizados para avaliar as lectinas obtidas. As levanas inibiram diferentemente a AH das lectinas. Con A e Cramoll 1,4 ligadas a FMZAG-12 foram eluídas com glicose, a eluição de Cramoll 1,4 mostrou o mesmo padrão eletroforético (duas bandas polipeptídicas). Cramoll 3 não se ligou ao suporte magnetizado. Quando a F40-60 foi incubada apenas a Cramoll 1 foi purificada, revelando uma banda polipeptídica (padrão). Levanas então inibiram diferentemente a AH das lectinas testadas e FMZAG-12 foi eficiente em purificar Cramoll 1 através de um protocolo mais rápido