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Use este identificador para citar ou linkar para este item: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/1762
Título: Purificação e caracterização de uma tripsina sensível a metal pesado do peixe Caranx hippos
Autor(es): Maria Silva da Costa, Helane
Palavras-chave: Espécies biomonitores;Metal pesado;Peixe marinho;Tripsina;Xaréu(Caranx hippos)
Data do documento: 2007
Editor: Universidade Federal de Pernambuco
Citação: Maria Silva da Costa, Helane; de Souza Bezerra, Ranilson. Purificação e caracterização de uma tripsina sensível a metal pesado do peixe Caranx hippos. 2007. Dissertação (Mestrado). Programa de Pós-Graduação em Bioquímica e Fisiologia, Universidade Federal de Pernambuco, Recife, 2007.
Resumo: A tripsina-símile extraída do ceco pilórico de xaréu (Caranx hippos) foi purificada por um procedimento de três etapas: tratamento térmico, precipitação com sulfato de amônio e cromatografia de gel-filtração em Sephadex G-75. Os efeitos de vários íons metálicos e inibidores de proteases na atividade digestiva da enzima in vitro foram determinados. As propriedades físico-químicas e cinéticas da tripsina foram estabelecidas. O pH e temperatura ótima de reação encontrada foram 8,0 e 50°C, respectivamente. Após 30 minutos de incubação a 50ºC, foi detectada uma perda de 20% da atividade tríptica. A constante de Michaelis Menten foi 1,21  0,38 mM usando benzoil-DL-arginina-pnitroanilida (BApNA) como substrato. Uma única banda (35,2 kDa) foi observada quando a amostra da enzima purificada foi aplicada em gel de eletroforese utilizando sulfato sódico de dodecila (SDS-PAGE, 12,5%). Atividade com substrato específico e inativação por inibidores de protease forneceram evidências adicionais que uma tripsina é responsável por esta atividade proteolítica. A tripsina de C. hippos apresentou sensibilidade a metais pesados. Utilizando soluções de íons na concentração de 1 mM, a tripsina foi inibida na ordem decrescente: Cd2+=Al3+>Zn2+>Cu2+>Pb2+>Hg2+. Menor efeito foi detectado com Co2+, K+, Li+, Ba2+, Mn2+, Mg2+e Ca2+. Contudo, a concentração tão baixa quanto 0,01 ppm (10 μg/mL) dos íons Zn2+, Cu2+, Hg2+, Pb2+, Cd2+ e Al3+ foram suficientes para inibir 34%, 33%, 33%, 32%, 29% e 28%, da atividade proteolítica, respectivamente
URI: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/1762
Aparece na(s) coleção(ções):Dissertações de Mestrado - Bioquímica e Fisiologia

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