Influência do Colcemid em análises de dosimetria citogenética: otimização metodológica

Abstract

O ensaio de cromossomos dicêntricos, em linfócitos do sangue periférico, é a técnica padrão-ouro em dosimetria citogenética para avaliação da dose de radiação individual absorvida. Neste tipo de ensaio, o Colcemid é empregado no cultivo celular para bloquear a mitose na fase de metáfase. Todavia, as propriedades do Colcemid, associadas à sua toxicidade, tornam a concentração e o instante de sua adição na cultura fatores críticos para a qualidade e a frequência das metáfases elegíveis para análise de dicêntricos. Nesse contexto, este estudo investigou a influência da concentração e do instante de adição do Colcemid para as análises de dicêntricos em biodosimetria. As amostras de sangue periférico coletadas de indivíduos voluntários foram separadas em duas alíquotas, sendo uma não irradiada utilizada como controle e a outra irradiada com 6 Gy através de um irradiador Gammacell (60Co). Posteriormente, as amostras foram cultivadas in vitro por 72h. No primeiro experimento, o Colcemid foi adicionado no início da cultura (t = 0h) em concentrações de 0,05 µg/mL e 0,10 µg/mL. No segundo experimento, as mesmas concentrações foram testadas, mas adicionadas em instantes diferentes: 24h e 45h de cultura. Após a incubação, as células foram fixadas com metanol e ácido acético (3:1); em seguida, as lâminas foram coradas pela técnica FPG e analisadas por microscopia óptica. Constatou-se que, para a metodologia proposta, a concentração de 0,05 µg/mL de Colcemid, adicionada no início da cultura, proporcionou os melhores índices mitóticos e frequências de metáfases em primeira divisão, atingindo valores superiores a 90%, eliminando a necessidade do uso da coloração FPG. Além disso, cerca de 63% das metáfases apresentaram qualidade adequada para análise, contribuindo para a melhoria do processo. Os resultados obtidos nesta pesquisa indicam que o emprego do Colcemid numa concentração de 0,05 µg/mL, adicionado no início da cultura de linfócitos, contribuem para uma maior precisão dos ensaios de cromossomos dicêntricos em biodosimetria, especialmente em eventos envolvendo exposição individual a doses de radiação ionizante elevadas (> 4 Gy).