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https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/57548
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Título: | Expressão e imunogenicidade de vacinas de DNA adjuvantadas e co-expressando oncogenes do HPV16 |
Autor(es): | MOURA, Ingrid Andrêssa de |
Palavras-chave: | Vacinas terapêuticas; Ácido nucléico; HPV; Imunomoduladores; Vetor bicistrônico |
Data do documento: | 30-Jul-2024 |
Editor: | Universidade Federal de Pernambuco |
Citação: | MOURA, Ingrid Andrêssa de. Expressão e imunogenicidade de vacinas de DNA adjuvantadas e co-expressando oncogenes do HPV16. 2024. Dissertação (Mestrado em Biotencologia) – Universidade Federal de Pernambuco, Recife, 2024. |
Abstract: | O câncer cervical, frequentemente associado ao papilomavírus humano (HPV), continua a ser um desafio global de saúde pública. Enquanto vacinações preventivas e rastreamento são eficazes na prevenção de novas infecções, o tratamento do câncer cervical persiste como um desafio. A imunoterapia ativa, especificamente por meio de vacinas de DNA, tem emergido como uma abordagem terapêutica promissora devido à sua segurança, facilidade de fabricação e capacidade de induzir respostas celulares contra antígenos tumorais. No entanto, devido à baixa imunogenicidade, a sua eficácia pode ser restrita, necessitando de otimizações. Assim, este projeto visou desenvolver uma vacina terapêutica de DNA baseada na coexpressão de antígenos E5 e E7 adjuvados para avaliar sua expressão e imunogenicidade em ensaios in vitro. Os plasmídeos de expressão foram construídos clonando os genes E5 e E7 do HPV16 com o adjuvante CP do vírus X da batata em pVAX1. Adicionalmente, para gerar o vetor bicistrônico, os genes ligados pela sequência IRES foram sintetizados no vetor pCDNA 3.1 para posterior subclonagem no vetor pVAX1. A expressão das vacinas foi avaliada por transfecção de células HEK-293T com os plasmídeos e detecção por RT- qPCR. Além disso, para caracterizar a resposta imunológica induzida pelas vacinas candidatas, as construções foram validadas por uma nova metodologia in vitro de cocultura de células THP-1 diferenciadas e transfectadas, incubadas com PBMCs. Utilizando esta metodologia, foi possível evidenciar a expressão de marcadores de superfície e citocinas, como CD14, CD80, CD69, CD8 e IFN-γ. Os resultados demonstram que a construção bicistrônica pVAX E5CP-IRES-E7CP promove uma expressão mais eficiente e sustentada dos antígenos vacinais, além de induzir uma resposta imune robusta, em comparação com os plasmídeos que expressam esses genes individualmente. Esses achados indicam que o arranjo dos genes na construção bicistrônica e a presença do elemento IRES influenciam positivamente a expressão dos mRNAs, melhorando a eficácia dos antígenos vacinais. |
URI: | https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/57548 |
Aparece nas coleções: | Dissertações de Mestrado - Biotecnologia Industrial |
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