Identificação e avaliação de um novo antígeno recombinante para o diagnóstico sorológico da leishmaniose tegumentar

Abstract

A leishmaniose tegumentar (LT), é uma infecção causada por protozoários do gênero Leishmania sp., apresentando ocorrência em todos os estados do Brasil. É considerada pela Organização Mundial de Saúde (OMS) como uma das mais importantes doenças negligenciadas, afetando aproximadamente 2 milhões de pessoas anualmente. As deformidades causadas pela LT envolvem lesões na mucosa, principalmente as regiões oral e nasofaríngea, podendo ser múltiplas, persistentes e desfigurantes. No entanto, o diagnóstico pode ser difícil devido ao vasto número de doenças que fazem diagnóstico diferencial com a LT- como, por exemplo, sífilis, hanseníase e turbeculose. Além disso, em áreas endêmicas diferentes espécies causam lesões semelhantes a LT, dificultando o diagnóstico precoce da doença. Os testes sorológicos não possuem eficiência ideal, além de apresentarem reações cruzadas com outros parasitas. Assim, a utilização de proteínas recombinantes tem sido uma alternativa promissora quando utilizada em testes sorológicos, como o ELISA, teste de diagnóstico rápido, demonstrando maior sensibilidade (95-100%) em relação a antígenos solúveis de Leishmania (V.) braziliensis. Baseado nesse estudo, buscou-se avaliar o potencial da proteína recombinante Lci9 no diagnóstico da leishmaniose tegumentar. O gene codificador da Lci9 foi subclonado em um vetor de expressão da série pRSET A. A proteína foi produzida em sistema procariótico, e foi efetuada padronização das condições de expressão. Também foi realizado teste de solubilidade com tampões contendo diferentes concentrações de ureia. A proteína foi purificada por cromatografia de afinidade, e avaliada no ELISA, com utilização de 10 soros positivos para leishmaniose tegumentar e 3 soros de indivíduos saudáveis. As melhores condições de expressão da proteína recombinante foram 30ºC, 0,5 mM de indutor (IPTG) e 3 horas de indução, sendo significativo somente para o rendimento e obtenção da proteína. A concentração de ureia na qual foi possível obter a proteína solubilizada foi 2 M. A purificação teve como rendimento final foi de 23,20 µg/mL. A Lci9 apresentou reatividade com os soros humanos positivos para LT, demonstrando ser uma proteína recombinante promissora para o diagnóstico desta doença, e que pode vir a ser utilizada em estudos futuros, junto a outros alvos antigênicos para desenvolvimento de um método mais eficaz para o diagnóstico precoce da LT.