Avaliação da sensibilidade de técnicas moleculares baseadas em LAMP para o diagnóstico da Esquistossomose mansônica

Abstract

A Esquistossomose é uma doença tropical negligenciada causada pelo parasito Schistosoma mansoni. O Kato-Katz, método de diagnóstico recomendado pelo ministério da saúde, apresenta uma baixa sensibilidade para as pessoas que possuem baixa carga parasitária. Assim, alternativas moleculares para o diagnóstico da doença podem ser utilizadas, visto que apresentam uma maior sensibilidade. O LAMP é um teste rápido, econômico, sensível e específico; ademais, pode ser adaptado para uso em campo na forma de kit diagnóstico, o que facilita mais o diagnóstico. Para isso, os reagentes precisam ter uma boa estabilidade ao longo do tempo e seu manuseio deverá ser minimizado para evitar contaminações, o que pode ser realizado por meio da liofilização dos reagentes. O trabalho apresentou como objetivos a avaliação da sensibilidade das técnicas SmMIT-LAMP e SmITS-LAMP com reagentes previamente liofilizados e a determinação da estabilidade dos reagentes não liofilizados ao longo do tempo. Para a avaliação da sensibilidade das técnicas LAMP, foram preparados dois Master Mix para a liofilização. O Sistema 1 foi preparado com todos os reagentes e o Sistema 2 foi preparado sem Betaína e enzima Bst 2.0 WarmStart®, as quais só foram adicionadas no momento do experimento do LAMP. Os sistemas SmMIT-LAMP e SmITS-LAMP foram liofilizados no liofilizador e, após isso, foram avaliados por meio de uma curva de sensibilidade analítica. Ademais, o SmITS-LAMP não liofilizado foi avaliado também por meio de uma curva de sensibilidade analítica em duas situações, geladeira a 4 °C e freezer a -25°C, em 0, 15, 30, 60, 90 e 180 dias. Na avaliação dos sistemas liofilizados, apenas o sistema 1 do SmITS-LAMP apresentou amplificação, com uma sensibilidade de 1 ng e o SmITS-LAMP ao longo do tempo apresentou estabilidade até 90 dias para o Sistema 1, armazenado no freezer, com uma sensibilidade de 1 pg. Com isso, conclui-se que a diminuição da sensibilidade do sistema liofilizado ocorreu devido à liofilização, sendo necessárias novas etapas de otimização do SmITS-LAMP para aumentar seu desempenho, o que pode auxiliar no desenvolvimento de um kit diagnóstico.