Desenvolvimento de imunossesor eletroquímico baseado no uso de polímero condutor e nanotubos de carbono para diagnóstico do infarto agudo do miocárdio

Abstract

A busca por métodos que possibilitem o diagnóstico mais rápido e eficaz do infarto agudo do miocárdio é preponderante atualmente. Como possibilidade analítica mais atrativa, os imunossensores são uma grande tendência na área cardiológica. Entretanto, para o aperfeiçoamento destes dispositivos, buscam-se continuamente algumas estratégias, tais como o uso de nanomateriais e polímeros condutores com objetivo de obter uma plataforma sensora mais sensível, estável e reprodutível. Neste trabalho, um filme nanoestuturado de nanotubos de carbono e polipirrol foi desenvolvido sobre a superfície de um eletrodo de platina para detecção eletroquímica da troponina T cardíaca humana. O filme de pirrol (0,3M) e nanotubos de carbono (0,1 mg/mL) foram eletropolimerizados através da técnica de cronoamperometria (0,8 V) sobre a superfície sensora. Os grupos carboxílicos reativos do filme foram ativados para imobilização covalente dos anticorpos anti-troponina T. Os sítios livres não reativos foram bloqueados com uma solução de glicina (0,01 M). A técnica de voltametria cíclica em sonda redox foi empregada para caracterização do processo de construção da plataforma sensora. Nos resultados obtidos, a eletrossíntese do pirrol em conjunto com os nanotubos apresentou um aumento significativo na transferência de elétrons. O tempo de polimerização do filme sobre a interface do eletrodo foi otimizado quando o ensaio croamperométrico foi programado para 80 s no potencial de 0,8 V. O filme de pirrol e nanotubos apresentou uma boa estabilidade eletroquímica, com coeficientes de variação para os picos redox ≤ 5%. Uma vez confirmada à viabilidade do filme, ensaios para otimização da concentração do anticorpo imobilizado, tempo de imunoreação e transferência de carga foram realizados. Uma curva de calibração foi obtida para quantificação livre de marcação da troponina T em amostras limpas, utilizando a técnica de voltametria de pulso diferencial. O imunossensor alcançou uma boa linearidade (r=0,94; p<0,0001) com erro relativo menor do que 1%, apresentando um limite de detecção de 0,006 ng/mL para cTnT. Com a metodologia proposta foi possível desenvolver um filme nanoestruturado em uma única etapa de síntese para determinação da troponina T humana em níveis de importância clínica.