Análise de expressão de fatores envolvidos na síntese de proteínas durante o ciclo de vida de Leishmania sp.

Abstract

Em eucariotos, a etapa crítica de iniciação da síntese protéica é aquela mais sujeita a mecanismos de de regulação. Esta etapa requer a participação de um conjunto de fatores de iniciação de tradução (eIFs), além de subunidades ribossomais. Entre os eIFs se destaca o complexo eIF4F, composto pelas subunidades eIF4FA, eIF4FE e eIF4FG. Em Leishmania, o controle da síntese das proteínas é essencial para a regulação da expressão gênica, mas tem sido pouco estudada. Neste patógeno, múltiplos homólogos para a subunidade do complexo eIF4FEforam identificados e tiveram sua expressão quantificada na forma promastigota (pm) do seu ciclo de vida. Neste trabalho, iniciou-se o estudo em Leishmania de um homólogo da proteína ribossomal P0, componente da subunidade 60S. A partir da clonagem de seu gene, expressão em Escherichia coli e produção de soro policlonal específico partiu-se para a quantificação de seus níveis intracelulares na forma pm, que se mostraram elevados (6,6x10e5 moléculas/células) e superiores para os observados para os homólogos de eIF4F. Em seguida, visando a analisar sua expressão durante o ciclo de vida do parasita, otimizou-se as condições de crescimentode espécies representativas de Leishmania nas suas formas promastigos metacíclica (pm-mt) e amastigota (am). Buscou-se então a detecção de proteínas de expressão estágio-específicas (A2 - am; META1 - pm-mt) para validar as curvas de crescimento, mas apenas a expressão de META1 foi confirmada, embora a forma Am tenha sido confirmada por microscopia. A expressão da proteína P0 mostrou-se constante nessas várias formas celulares. Em comparação, a expressão de um homólogo da proteína eIF4G, LmeIF4G3, também se mostrou contante, enquanto que um segundo homólogo, LmeIF4G1, só foi detectado nas formas am e pmdo parasita. Ensaios com outors homólogos de eIF4F estão sendo realizados, esperando-se caracterizar melhor os processos que envolvem a iniciação da tradução em Leishmania e o controle de sua diferenciação celular