Análise da expressão e investigação de mecanismos envolvidos com o controle da atividade de homólogos do fator de iniciação da tradução eIF4E ao longo do ciclo de vida de Leismania amazonensis

Abstract

Os tripanossomatídeos são protozoários que causam manifestações clínicas de impacto mundial e possuem características bioquímicas peculiares que os diferem dos demais eucariotos. Sua expressão gênica é regulada em nível pós-transcricional, provavelmente no estágio de iniciação da síntese protéica. A tradução cap-dependente é iniciada através da ligação do fator de iniciação eIF4E, pertencente ao complexo eIF4F, ao cap presente na extremidade 5 dos mRNAs. Foram identificados múltiplos homólogos do fator EIF4E nestes parasitas, que provavelmente estão associados ao seu complexo ciclo de vida. Neste trabalho, nós buscamos entender como ocorre a expressão de quatro homólogos deste fator (EIF4E1-4) durante o ciclo de vida de Leishmania amazonensis. Para tal, foram realizadas curvas a fim de se obter as três principais formas evolutivas do parasita. Todos os homólogos estão presentes ao longo da curva e os EIF4E2-4 apresentam múltiplas isoformas, sugerindo modificações pós-traducionais por fosforilação. Destes, as isoformas dos EIF4E3 e 4 apresentaram expressão constrastante que não interferem com sua localização subcelular, citoplasmática. A ausência de soro fetal bovino no meio induziu uma desfosforilação prematura do EIF4E4 e uma hiperfosforilação do EIF4E3, associados à falta de crescimento celular. EIF4E3 desfosforilado e EIF4E4 fosforilado estão associados a uma maior atividade de tradução. A presença de um inibidor de transcrição influenciou no padrão de expressão dos dois homólogos, porém um inibidor de tradução afetou apenas o EIF4E3. Estes resultados indicam que os homólogos de eIF4E atuam de forma distinta na célula e que a fosforilação deve ter um papel significante na regulação destes fatores em Leishmania e na regulação da síntese de proteínas como um todo