Método de isolamento do diterpeno pinusolide em Thuja occidentalis Linn (Cupressaceae)

Abstract

A presente patente refere-se à descrição das etapas metodológicas necessárias para o isolamento e identificação do diterpeno pinusolide, pertencente à classe dos labdanes. A pinusolide, segundo vários relatos da literatura, atribui-se como principal propriedade a potente e específica ação antagonista do receptor ligante do fator de ativação plaquetária, além da atividade anti-inflamatória e anti-leucêmica. Para efeito de isolamento, a droga vegetal foi extraída durante dois dias com diclorometano e o material vegetal obtido foi novamente re-extraído para esgotamento da droga vegetal. Após, o extrato foi filtrado e exposto à secura. Em seguida, por meio da análise em coluna cromatográfica via úmida filtrante com vários sistemas de solventes orgânicos, obteve-se a fração F3, eluída com hexano/acetato de etila (50:50). A fração obtida foi levada à secura e colocada para fracionamento em coluna de isolamento. O perfil cromatográfico da fração F3 foi visualizado por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE), sendo esta fração previamente tratada por meio de extração em fase sólida (SPE). Porém, para otimizar o método de isolamento da substância de interesse, foi proposto o sistema isocrático com H~ 2~O e ACN, com fator de separação k=20, contendo o sistema H~ 2~O/ACN (38:62). Apesar da boa resolução de F3, o solvente orgânico foi ainda mais enfraquecido e, utilizando-se o nomógrafo de fase reversa para substituir a ACN por MeOH, mantendo constante a força da fase móvel, chegou-se ao sistema H~ 2~O:MeOH (25:75), que ainda foi enfraquecido, chegando-se a H~ 2~O/MeOH (30:70), que forneceu condições suficientes para isolamento da substância isolada (S1). A substância S1 foi coletada no CLAE e identificada por meio de variadas técnicas de Ressonância Magnética Nuclear (RMN).